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产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
RNase A(来源于牛胰腺) | Ribonuclease A from bovine pancreas | 100mg|1g | CS-01F96572 |
RNase A一种含4个二硫键的单链多肽,分子量约为13.7kDa(氨基酸序列)。作为一种核糖核酸内切酶(endoribonuclease),特异性降解单链RNA上的胞(C)或(U)残基。具体来说,切割识别的是由某核苷酸上的5’-核糖和相邻的类核苷酸3’-核糖上磷酸基团形成的磷酸二酯键,从而使得2’,3’-环磷酸水解为对应的3’-核苷磷酸(比如,pG-pG-pC-pA-pG经RNase A切割产生pG-pG-pCp和A-PG)。
RNase A切割单链RNA活性高,推荐工作浓度为1-100μg/mL,兼容于各种反应体系。低盐浓度(0-100mM NaCl),可用来切割单链RNA,双链RNA,以及RNA-DNA杂交形成的RNA链。然而,高盐浓度(≥0.3M),RNase A仅特异性切割单链RNA。
RNase A常见的应用在于质粒DNA或基因组DNA制备过程中去除RNA,此制备过程中DNase酶活性的存在与否是需要重视的污染之一,可采用水浴煮沸这种传统方法来灭活DNase活性。另外,本品还可用于RNA酶保护分析、RNA序列分析等分子生物学实验。 贮存液制备: 此为RNase A储存液配制的常用方法之一,也可以根据实验室传统的方法,或者参考文献资料使用其他方法制备储存液(如直接溶于10mM Tris-Cl,pH7.5或者Tris-NaCl溶液)。 1.利用10mM的醋酸钠(pH5.2)制备10mg/mL的RNase A贮存液; 2.100℃加热15min; 3.冷却到室温,加入1/10体积的1M Tris-HCl(pH7.4),调其pH至7.4(如:5mL 10mg/mL的RNase储存液加入500μL 1M Tris-HCl,pH7.4); 4.分装于-20℃冻存,可稳定保存长达2年。
注意:在中性条件下煮沸RNase A溶液,会有RNase沉淀形成;在更低的pH下将其煮沸,如有沉淀可以观察到,可能由于蛋白杂质存在造成。煮沸之后若发现沉淀,可通过高速离心(13,000rpm)去除杂质,然后分装冻存。 |
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