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产品名称:
全血基因组DNA提取系统(沉淀法)
型号:
CS-01F96566
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全血基因组DNA提取系统(沉淀法)现货供应,价格实惠。
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一、概述:

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全血基因组DNA提取系统(沉淀法)

Blood Genomic DNA Extraction Kit (Ethanol precipitation)

50T|200T

CS-01F96566

本试剂盒适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的血液样品,采用异丙醇沉淀方法,操作简便,尤其适合大量提取血液基因组DNA。提取的DNA可用于PCR、酶切等常规分子生物学实验。少量样本也可选购我公司吸附柱型试剂盒(全血基因组,货号QN0893)

保存:室温(15℃~25)干燥,有效期12个月。

注意事项:

样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

若试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响提取效果。

使用前请根据使用量将10×红细胞裂解液用水稀释成1×的即用型红细胞裂解液。

使用方法:

本操作步骤以1mL全血为例

样品的处理:在血液中加入3倍体积的1×红细胞裂解液(请确认已经稀释过),充分颠倒混匀,12000rpm离心1min(如为大量提取并且为大离心机,可11000转离心5min),小心吸去上清,再加入2倍体积的1×红细胞裂解液,用移液器轻轻吹打沉淀,充分混匀,离心,弃上清,沉淀为白细胞。

向沉淀中加500μL白细胞裂解液,振荡或者用移液器吹打至彻底混匀。65℃水浴1020min,期间可颠倒离心管混匀数次,直至溶液较为清澈看不见明显细胞为止。

加入500μL蛋白沉淀液,充分颠倒混匀,此时会出现白色沉淀,65℃水浴5min12000rpm离心5min,小心吸取上清(不要吸到下层沉淀或漂浮不溶物),转移到干净离心管中,如还有沉淀物,可再次离心。

在上清中加入1mL异丙醇,混匀。12000rpm离心5min,可看到管底有少量白色DNA沉淀,弃掉上清。

向离心管中加入1mL 75%乙醇,12000rpm离心5min,弃去上清液。可再次短暂离心用移液器去除残余上清。

将离心管敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟,否则乙醇可能影响后续的实验如酶切、PCR等。

 

向离心管中加入100300μL DNA溶解液,室温放置让DNA自然溶解。如果DNA难于溶解,可室温放置过夜或将离心管置于5060℃水浴中水浴加热5min

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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