使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。溶液P1在使用前先将试剂盒中提供的RNase A全部加入，混匀，置于2～8℃保存。如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

操作步骤：

取1～5mL细菌培养物，12000rpm离心1min，吸除上清（菌液浓度较低时可多次离心收集到一个离心管中）。

向留有菌体沉淀的离心管中加入200μL溶液P1(请先检查是否已加入RNase A），使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。

注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

向离心管中加入200μL溶液P2，温和地上下翻转6～8次使菌体充分裂解。

注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要过5min，以免质粒受到破坏。

向离心管中加入200μL溶液P3，立即温和地上下翻转6～8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。12000rpm 离心10min，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，尽量不要吸出沉淀。

注意：溶液P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。

加入上清1/5体积的冰上预冷的内毒素清除剂，振荡混匀，溶液变浑浊，冰浴2min至溶液变清亮。

37℃水浴5min，不时振荡，溶液又变浑浊。12000rpm室温离心5min，溶液应分为两相，上层水相含质粒DNA，下层油相含内毒素。

将含质粒DNA的上层水相转移至新管，弃下层油相，注意不要吸入油状相。重复步骤5～7三次。

加入600μL的溶液P4，充分混匀后加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。如果溶液量多可分多次加入。

向吸附柱中加入600μL漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

向吸附柱中加入600μL漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。

将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50～200μL经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置2min，12000rpm离心1min。

为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm离心1min。