注意：

使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。溶液Ⅰ在使用前先加入RNase A（将试剂盒中提供的RNase A全部加入），混匀，置于2～8℃保存。如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

保存：常温保存，复检期一年。

操作步骤：

收集50～100mL过夜培养的菌液11000rpm离心10分钟，尽量吸除上清(菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中)。

向留有菌体沉淀的离心管中加入5mL溶液Ⅰ (请先检查是否已加入RNaseA)，使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。

注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

向离心管中加入5mL溶液Ⅱ，温和地上下翻转6～8次使菌体充分裂解。

注意：

① 翻转一定要温和，以免污染细菌基因组DNA。

② 作用时间不要过5分钟，以免质粒受到破坏。

向离心管中加入7mL溶液Ⅲ，立即温和地上下翻转6～8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀(如菌液过多，可在此步放置5分钟，以尽可能的降解RNA)。11000rpm离心10分钟，用移液器小心地将上清转移到另一个干净的离心管中，注意尽量不要吸出沉淀。

注意：溶液Ⅲ加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。

将上一步所得上清液加入吸附柱中(吸附柱放入收集管中)，室温放置2～3分钟，11000rpm离心30～60秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中(如为提高得率，可将收集管中的液体加入吸附柱再次吸附一次)。

向吸附柱中加入8mL漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，11000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

向吸附柱中加入6mL漂洗液，11000rpm离心2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。

11000rpm离心5min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影晌后续的实验如酶切、PCR等。

将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加1～2mL经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，11000rpm离心2min，收集质粒溶液用于后续实验。

为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中，室温放置5min，11000rpm离心2min。