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产品名称:
DNA纯化回收试剂盒(磁珠法)
型号:
CS-01F96556
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产品简介
DNA纯化回收试剂盒(磁珠法)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

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DNA纯化回收试剂盒(磁珠法)

MagBeads DNA Purification Kit

5ml|50ml

CS-01F96556

本试剂盒提供了一种简单、快速、高效的核酸纯化方法。该产品可用于二代测序建库时DNA的选择性或非选择性回收,以及PCR产物的纯化回收。试剂盒中的MagPure与样品按一定比例混合后,磁珠选择性将核酸吸附。经两步漂洗后,洗脱得到的DNA纯度高,A260/A280的比值在1.7-1.9之间,A260/A230的比值通常在2.0以上。经该试剂盒纯化得到的DNA适用于PCRReal-Time PCR,测序,southern blotting等实验。

保存条件:2-8℃保存,室温运输。

自备仪器及试剂:

1.磁力架

280%乙醇。

3.洗脱液:Buffer EB (10mM Tris-HCl,pH8.0);去离子水(pH7.0-8.0之间)

实验前准备及重要注意事项:

1.冰冻、离心、声会对MagPure中的磁珠造成不可逆的损害。

2MagPure中磁珠长期放置后会聚集成团,从而使磁珠表面积减小,降低样品回收得率,使用前一定要涡旋振荡彻底混匀磁珠。

3.使用前,建议将MagPure涡旋震荡混匀后分装到1.5ml的离心管中,每管分装1ml MagPure

4.本试剂盒不适用于纯化回收小于100 bpDNA片段,如果要回收小于100 bpDNA片段,建议将MagPure的用量增加到样品体积的4倍。

5.进行DNA的选择性回收时,MagPure对于DNA溶液中的离子浓度较为敏感。不同厂家的二代测序建库试剂盒得到的接头连接后的DNA溶液以及PCR扩增产物中离子浓度不同,所以用MagPureDNA选择性回收时,试剂用量有所不同。

操作步骤:

1.涡旋振荡MagPure 20秒,使其彻底混匀为均一溶液。

2.向1.5ml的离心管中加入纯化的DNA溶液。

3.向上一步的离心管中加入2倍样品体积的MagPure,涡旋震荡5秒后室温静置5分钟。

4.将上一步的离心管放于磁力架上,直至磁珠完全吸附(约需5分钟)。

5.保持离心管固定于磁力架上,彻底弃去溶液,期间避免接触磁珠。

6.继续保持离心管固定于磁力架上,向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇。

7.保持离心管固定于磁力架上,待悬起的磁珠完全吸附后彻底弃去乙醇。

8.重复步骤6-7两次。

9.保持离心管固定于磁力架上静置放置10分钟,使乙醇完全挥发干净。

10.将离心管从磁力架上取下,加入20-100μl EB(自备)或去离子水,涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中后,室温放置5分钟。

11.将离心管放于磁力架上直至磁珠完全吸附(约需5分钟)。

 

12.将洗脱液转移至一个新的1.5ml离心管中。此时,可弃去磁珠。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签:DNA纯化回收试剂盒(磁珠法) 

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