试剂盒组份：

酵母裂解液——————100ml×2

蛋白沉淀液——————70ml

DNA溶解液 ——————30ml

产品特点：

1.不需要使用有毒的、氯仿等试剂。

2.快速，简捷，整个过程可在1个小时内完成。

3.结果稳定，产量高（比离心柱型的产量高一倍以上），OD260/OD280典型的比值达1.7～1.9，长度可达50Kb-150kb，可直接用于PCR，Southern-blot和各种酶切反应以及文库构建。

操作步骤：

1. 吸取60ml-70ml 酵母培养物到一个100ml 离心管；2,500 x g 离心2 分钟，尽可能弃上清，必要时候可以用枪吸去。

2. 高速涡旋振荡，打散重悬酵母细胞团。

3. 加入20 ml 酵母裂解液，涡旋振荡混匀，或者用1 毫升的枪头反复吹打混匀。酵母细胞的重悬分散对下一步裂解非常重要，必须充分分散重悬。

4. 将裂解物放置在70℃水浴15-30 分钟。

如果产量低，可以适当提高水浴温度和延长水浴时间，中间可以涡旋振荡混匀几次帮助裂解。

5. 冰上至少5 分钟使回复到室温。

6. 在回复到室温的裂解物内加入6.8 ml 蛋白沉淀液后，在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀25 秒。混匀后可能见到一些小的蛋白团块。冰浴5 分钟。

7. 2,500 x g(可根据需要调整加大离心力)离心5 分钟。这时应该可以见到管底蛋白沉淀，也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。

8. 小心缓慢吸取上清到一个新的100ml 离心管中，不要吸到沉淀。吸取上清时，注意不要吸到管底的和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心2 分钟后取上清。

9. 加入等体积的室温异丙醇，颠倒30 次混匀或者直到出现絮状DNA 沉淀（或者白色浑浊沉淀）。

10. 2,500 x g 离心5 分钟(可根据需要调整加大离心力)，在管底可以见到白色的DNA沉淀块，倒弃上清。

11. 加入20ml 70％乙醇，颠倒几次漂洗DNA 沉淀，2,500 x g 离心2 分钟， 倒去上清（注意不要把DNA 沉淀倒掉了），倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇，还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇，空气晾干沉淀几分钟。注意不要干燥过头，否则DNA极其难溶；也不能残留太多乙醇，否则乙醇可能抑制下游如酶切反应。

12. 加入1-3ml DNA 溶解液重新水化溶解DNA 沉淀，轻弹管壁混匀，可以放置在65℃温育30-60 分钟（不要过一小时），也可以在室温或者4℃放置过夜来重新水化DNA。期间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA。

13. 加入0.5-1ml RNase A（10mg/ml），颠倒混匀，37℃温育30－60 分钟去除残留RNA。该步骤主要作用为去除残留的RNA，如果残留RNA多，可以适当延长时间或者增加RNase A 用量。如果残留RNA 不影响实验，可略去该步骤。如果残留的RNA酶可能影响实验，也可以用等体积酚/氯仿抽提去除，然后用标准的乙醇沉淀回收DNA。

14. DNA 可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

储存条件：室温，有效期12个月。

本制品别名：酵母DNA大量提取试剂盒|大龄酵母