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产品名称:
土壤基因组DNA快速提取试剂盒
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CS-01F96539
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土壤基因组DNA快速提取试剂盒现货供应,价格实惠。
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一、概述:

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土壤基因组DNA快速提取试剂盒

Ultra pure soil genomic DNA rapid extraction kit

50

CS-01F96539

本试剂盒适用于快速提取各种土壤基因组DNA。普通的手提或者试剂盒提取的土壤基因组DNA由于常常残留有PCR的烈抑制物如腐殖酸、棕黄酸等杂质造成实验失败,此外,由于采用了剧烈的玻璃珠击打来破裂菌体,常常造成DNA剪切和降解。本试剂盒使用腐殖酸和棕黄酸去除试剂配合特殊处理的纯化柱,可以大程度的去除这些杂质,同时加上多次柱漂洗,确保得到的DNA具有极高纯度,此外独特的抽提和裂解体系可以迅速裂解细胞(壁)和灭活细胞内核酸酶,不需要借助玻璃珠破壁,有效保证了基因组DNA的完整性。

试剂盒组份(50)

溶液SUS—————————25ml

溶液LYS—————————6ml

溶液S1—————————15ml

溶液S2—————————15ml

溶液S3—————————30ml

抑制物去除液IR—————25ml

漂洗液WB————————15ml

洗脱缓冲液EB——————10ml

蛋白酶K(20mg/ml)————20mg

吸附柱AC和收集管————50

产品特点:

1.本公司特别配方和纯化柱能有效去除腐殖酸等杂质。

2.不需要借助玻璃珠破壁,有效保证了基因组DNA的完整性,长度可达30kb50kb,可直接用于PCRSouthern-blot和各种酶切反应。

3.兼容性,适用于各种不同的土壤包括淤泥等提取困难的土壤。

4.多步骤去除各种杂质和抑制物,保证了极高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.71.9

5.不需要使用有毒的等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。

6.快速,简捷,单个样品操作一般可在60分钟内完成。

注意事项:

1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2. 开始实验前根据需要将水浴预热到37℃或者70℃备用。

3. 溶液S3 和抑制物去除液IR 中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4. 洗脱液EB 不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保批pH 大于7.5 pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA 应该保存在-20℃。DNA 如果需要长期保存,可以用TE 缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl1mM EDTApH 8.0),但是EDTA 可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。

储存条件:室温,有效期12个月。

 

本制品别名:土壤|土壤基因组提取试剂盒|土壤基因组

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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