上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
唾液DNA收集提取试剂盒
型号:
CS-01F96537
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产品简介
唾液DNA收集提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

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唾液DNA收集提取试剂盒

Saliva DNA collection, preservationtransport and extraction Kit

10|50

CS-01F96537

本试剂盒针对唾液样本中的DNA 进行收集、保存、运输、纯化。可提供无疼痛、非侵入性的方法,患者不用忍受抽血的疼痛和感染的风险就能获得高质量、高数量的样品,受测者排斥性低,婴儿和老人都能方便取得DNA样本。收集过程十分简单,受测者将唾液吐至保存液内混匀就完成收集过程。混匀后常温下可运输保存长达一年不会变质。能够节省运送、保存冷藏设备和电力费用。收集的唾液通过几个简单步骤便可提取DNA。抽取的DNA产量高达110μg/2mL唾液。

试剂盒组份(50)

保存液———————————2ml×50

细胞裂解液—————————50ml

杂质沉淀液—————————85ml

DNA溶解液——————————20ml

5ml采集管——————————50

产品特点:

1.非侵入性采检方式免除了抽血的疼痛和降低了污染风险,并增加了取检的便利性,可由受检者自行取样。

2.仅需2ml的唾液样本,即可取得约110μgDNA(不同个体产量差异很大)

3.采样后的检体可稳定地储存于室温环境一年以上。

唾液样品收集步骤:

1. 用清水漱口12 次,然后吐掉。

2. 漱口后等候至少5 分钟方可采集唾液,期间不要进食、饮用各种饮料。

3. 将唾液(不是喉咙中痰液)吐到5ml 采集管中,直至2ml 刻度位置。(不可将痰液吐到收集管中,若唾液不足,可做口舌运动,促进分泌。浮在唾液上层的少量泡沫不包括计算在2ml 唾液采集量内,采集过程必须在30 分钟内完成)

4. 将等体积2ml 保存液全部倒在5ml 唾液采集管中,充分颠倒混匀后旋紧盖子。

唾液DNA提取步骤(2ml唾液量举例,可按比例放大缩小每次提取的唾液量)

1. 将保存液/唾液混合物放置于50 水浴中至少1 小时或50 空气孵箱至少2 小时。

2. 转移4ml 混合物(2 ml 唾液加2 ml 保存液)到一个15 ml 或者50 ml 的离心管。

3. 加入1ml 裂解液和10 μl RNase A 溶液(10mg/ml). 高速涡旋振荡10 秒后室温放置10分钟。

4. 加入1. 7 ml 杂质沉淀液到上述裂解混合物中。

5. 高速涡旋振荡25 秒,充分混匀杂质沉淀液和裂解混合物。

6. 2500g离心5分钟。沉淀的杂质和蛋白会在管底形成一个致密的沉淀团。如果蛋白沉淀不太致密,可以冰上放置5分钟,然后重复步骤6

7. 仔细转移上清(含有DNA)到一个新的15 ml 或者50 ml 的离心管。注意不要触动管底沉淀。加入5ml 异丙醇。(唾液DNA 含量较低时,加入40μl Glycogen 20mg/ml可能提高一些产量)

8. 轻柔颠倒混匀50 次。

9. 2000g 离心3 分钟, 此时一般可在管底看到白色的DNA 沉淀。

10. 倒弃上清, 倒置后在吸水纸上轻敲几下以尽可能吸干。加入5ml 70%乙醇,颠倒几次漂洗DNA 沉淀。

11. 2000g 离心1 分钟, 仔细倒去上清(沉淀很松,注意不要把DNA 沉淀倒掉了)

12. 倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇,还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇,空气晾干沉淀几分钟(不要干过头,也不要残留乙醇)

13. 加入250μl -400μl DNA 溶解液重新水化溶解DNA 沉淀,轻弹管壁混匀。

14. 可以放置在65℃温育30-60 分钟(不要过一小时),然后在室温或者4℃放置过夜来重新水化DNA,中间不时的轻弹管壁帮助重新水化DNA

 

15. DNA 可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20 或者-80℃。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签:唾液DNA收集提取试剂盒 10次 50次 

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