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产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
RNA/DNA/蛋白分提试剂盒 | AllExtract Tissue/Cells RNA/DNA/Protein Isolation Kit | 50次 | CS-01F96536 |
本试剂盒用于快速从动物细胞或者组织样品中同时提取分离基因组DNA、总RNA和蛋白。无、氯仿DNA/RNA快速提取技术基础上配合独特的分离技术同时得到的RNA/基因组DNA纯度高,互不干扰。得到的RNA不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。基因组DNA也可以直接用于下游的Southern、酶切、PCR等各种试验。
试剂盒原理: 独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNase、DNase,然后裂解混合物同时通过一个基因组DNA吸附柱,基因组DNA被吸附而RNA和蛋白穿透滤过。DNA吸附柱上基因组DNA经过一系列漂洗-离心后洗脱得到纯净基因组DNA。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于RNA吸附柱上,再通过一系列快速的漂洗-离心洗脱得到纯净的RNA。滤液经选择性沉淀得到蛋白。 试剂盒特点: 完全不使用有毒的,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速,简捷,单个样品RNA、基因组DNA和蛋白分离操作一般可在1小时内完成。 试剂盒的独特吸附柱和配方确保有效清除基因组DNA残留,一般情况下得到的RNA不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。 多次柱漂洗确保RNA/基因组DNA高纯度,可直接用于下游各种实验。 保存:室温,有效期12个月。 保存事项: 所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。 不合适的保存于低温(4℃或-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15~25℃)进行。 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。 注意事项: 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C或者类似离心机。 样品处理量绝对不要过基因组吸附柱和和RNA吸附柱处理能力,否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大,例如胸腺脾脏DNA含量丰富,过5mg就会过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富,过3×106细胞就会过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时,如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量,如细胞不过3~4×106,组织不过10mg。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。 裂解液RLT、抑制物去除液IR、去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。 该试剂盒如需要用于植物样品有其实多糖多酚次级代谢产物丰富的困难样品的DNA/RNA/Protein提取,请咨询技术人员,可能需要用到其它试剂。 关于DNA的微量残留: 一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留(DNase消化也无法做到100%无残留),本公司的组织/细胞RNA/DNA/Protein分提试剂盒,由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA分离清除技术,绝大多数DNA已经被清除,不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时: 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。 将RNA提取物用RNase-free的DNase I处理以提高效果。
在步骤去蛋白液RW1漂洗前,直接在吸附柱上进行DNase I处理。 |
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