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组织细胞DNA/RNA分离提取试剂盒 | Tissue cell DNA/RNA Extraction Kit | 50次 | CS-01F96535 |
本试剂盒设计用于快速从同一个动物细胞或者组织样品中同时提取分离基因组DNA和总RNA。独特的裂解液迅速裂解细胞和灭活细胞RNA/DNA酶,然后裂解混合物DNA/RNA同时通过一个基因组DNA吸附柱,基因组DNA被吸附而RNA穿透滤过。DNA吸附柱上基因组DNA经过一系列漂洗-离心后洗脱得到纯净基因组DNA。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于RNA吸附柱上, 再通过一系列快速的漂洗-离心洗脱得到纯净的RNA。无、氯仿DNA/RNA快速提取技术基础上配合独特的分离技术同时得到的RNA/基因组DNA纯度高,互不干扰。得到的RNA不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。基因组DNA也可以直接用于下游的Southern、酶切、PCR等各种试验。
试剂盒特点: 1.完全不使用有毒的,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。 2.快速,简捷,单个样品RNA/基因组DNA分离提取操作一般可在40分钟内完成。 3.试剂盒的独特吸附柱和配方确保有效清除基因组DNA残留,一般情况下得到的RNA不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。 4. 多次柱漂洗确保RNA/基因组DNA高纯度,可直接用于下游各种实验。 注意事项: 1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2. 样品处理量绝对不要过基因组吸附柱和和RNA吸附柱处理能力,否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大,例如胸腺脾脏DNA含量丰富,过5mg就会过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富,过3×10^6细胞就会过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时,如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量,如细胞不过3~4×10^6,组织不过10mg。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。 3. 裂解液RLT Plus、抑制物去除液IR、去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。 4. 预防RNase污染,应注意以下几方面: 1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase 污染。 2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。 3) RNA在裂解液RLT Plus中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时,塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分钟,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。
4) 配制溶液应使用无RNase的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%( v/v),37℃放置过夜,高压灭菌。) |
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