试剂盒特点：

离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

快速、方便，不需要使用有毒的、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。

注意事项：

本试剂盒适用菌株为XL-1 Blue和DH5α等核酸酶含量低缺陷型菌株。所用菌株为JM系列、HB101等endA菌株或野生型菌株，核酸酶含量丰富，应购买本公司的高纯度质粒小量快速提取试剂盒。

所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C或者类似离心机。

溶液P3中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。一般高拷贝质粒，建议接种单菌落于1.5～4.5mL加合适抗生素的LB培养基，过夜培养14～16个小时，可提取出多达20μg的纯净质粒。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应适当加大菌体使用量，使用5～10mL过夜培养物，同时按比例增加P1、P2、P3的用量，其它步骤相同。

得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本螺旋可以过90%。

质粒DNA确切分子大小，必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知道。处于环状或者螺旋状态的的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。

洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在-20℃。质粒DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）

提示：

① 次使用前请先在漂洗液WB中加入量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

② 将RNase A全部加入溶液P1中，混匀，每次使用后置于2～8℃保存。

③ 将溶液P3放在冰上预冷。

取1.5～4.5mL过夜培养的菌液，9000rpm离心30秒，尽可能的倒干上清，收集菌体。

收集过1.5mL菌液，可以离心弃上清后，在同一个1.5mL管内加入更多的菌液，重复步骤1，直到收集到足够的菌体。

用250μL溶液P1重悬菌体沉淀，涡旋振荡至彻底悬浮。

如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。

加250μL的溶液P2，温和地上下翻转4～7次使菌体充分裂解，室温放置4分钟。

温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA剪切断裂！所用时间不应过5分钟！以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠，如果菌体少，很快清亮粘稠后就可以做下一步，不是一定要准确的5分钟。

加350μL溶液P3，立即温和地上下翻转4～7次，充分混匀时会出现白色絮状沉淀。

冰上静置3～5分钟，13000rpm离心10分钟，小心取上清。

加入溶液P3后应该立即混匀，以免产生SDS的局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。

将上一步所得上清加入吸附柱AC中（吸附柱放入收集管中），13000rpm离心30～60秒，倒掉收集管中的废液。

加入500μL漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12000rpm离心30秒，弃掉废液。

加入500μL漂洗液WB，12000rpm离心30秒，弃掉废液。

将吸附柱AC放回空收集管中，13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加50μL洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在65～70℃水浴中加热效果更好），室温放置2分钟，12000rpm离心1分钟。如果需要较多量质粒，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心1分钟。

洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要质粒浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是小体积不应少于30μL，体积过小降低质粒洗脱效率，减少质粒产量。