上海莼试生物技术有限公司
热卖产品最新促销最新推荐
分子生物学试剂 > DNA提取纯化 > 一步法质粒小提试剂盒(0.5~5mL)
产品名称:
一步法质粒小提试剂盒(0.5~5mL)
型号:
CS-01F96532
生产地址
国产
产品价格
电议
产品简介
一步法质粒小提试剂盒(0.5~5mL)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

英文名称

规格

货号

一步法质粒小提试剂盒(0.55mL)

One-Step Plasmid Kit(0.5-5mL)

100

CS-01F96532

本试剂盒采用一步式细菌裂解技术,只需要一种溶液处理即可以完成细菌裂解,并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA

试剂盒特点:

一步式,提取一个样品只需5分钟左右,比传统的碱变性方法快捷。

适用于高拷贝、中拷贝和低拷贝质粒的提取。适用于各种E.coli宿主菌。

质粒DNA产量跟经典碱变性法相当,一般15mL可以得到315μg(对低拷贝质粒)和535μg(对高拷贝质粒)。

所得质粒DNA呈螺旋结构的比例比碱变性法更高。

基因组DNA污染少。但由于操作太快,溶液中的RNase来不及降解RNA,一般会有少量RNA污染,但不影响后续实验。

可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆、测序等后续实验

保存条件:

常温运输及保存(溶液A需要4℃保存),有效期一年。

使用方法:

用塑料离心管收集0.55mL过夜培养的饱和新鲜菌液,室温14000g离心半分钟,弃上清(培养基)。也可以使用-20℃冻存的细菌沉淀和4℃放置过夜的饱和细菌培养液,但质粒回收效率稍低。如果是中拷贝和高拷贝质粒,使用1.5mL菌液即可,如果是低拷贝质粒,好使用35mL菌液。常见质粒拷贝数请参考附表。

在细菌沉淀中加入700μL溶液A,充分吹打或涡旋振荡半分钟。

将裂解液全部转移到离心吸附柱中,直接离心。如果静置35分钟后再离心,会提高质粒产量10%左右。

室温14000g离心1分钟,弃穿透液。如果使用35mL起始菌液,则此步的离心时间可以延长1分钟以确保所有液体成功过柱,吸附柱中没有残留液体。

在离心吸附柱中加入700μL的通用洗柱液,室温14000g离心半分钟,弃穿透液。

室温14000g离心半分钟,甩尽残留液体。

注意:此步不能省略。

将离心柱置于一个自备的1.5mL塑料离心管中,在离心柱中加入3050μL DNA洗脱液2.0(对低拷贝质粒建议用30μL洗脱,对高拷贝质粒建议用50μL洗脱)

 

室温14000g离心半分钟,离心管底溶液即质粒DNA,可以直接用于后续实验(浓度测定、酶切、电泳和测序)或放冰箱长期保存。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签:一步法质粒小提试剂盒(0.5~5mL) 100次 

联系我们

联系人:高小姐

手    机:13585831301

Q      Q:3004967995

座    机:021-59541103

传    真:021-60443211

地    址:上海嘉定区嘉罗公路1661