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产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
一步法质粒小提试剂盒(0.5~5mL) | One-Step Plasmid Kit(0.5-5mL) | 100次 | CS-01F96532 |
本试剂盒采用一步式细菌裂解技术,只需要一种溶液处理即可以完成细菌裂解,并且裂解物可以直接上柱纯化质粒DNA。
试剂盒特点: 一步式,提取一个样品只需5分钟左右,比传统的碱变性方法快捷。 适用于高拷贝、中拷贝和低拷贝质粒的提取。适用于各种E.coli宿主菌。 质粒DNA产量跟经典碱变性法相当,一般1~5mL可以得到3~15μg(对低拷贝质粒)和5~35μg(对高拷贝质粒)。 所得质粒DNA呈螺旋结构的比例比碱变性法更高。 基因组DNA污染少。但由于操作太快,溶液中的RNase来不及降解RNA,一般会有少量RNA污染,但不影响后续实验。 可以直接用于电泳、酶切、PCR、细菌转化、分子克隆、测序等后续实验 保存条件: 常温运输及保存(溶液A需要4℃保存),有效期一年。 使用方法: 用塑料离心管收集0.5~5mL过夜培养的饱和新鲜菌液,室温14000g离心半分钟,弃上清(培养基)。也可以使用-20℃冻存的细菌沉淀和4℃放置过夜的饱和细菌培养液,但质粒回收效率稍低。如果是中拷贝和高拷贝质粒,使用1.5mL菌液即可,如果是低拷贝质粒,好使用3~5mL菌液。常见质粒拷贝数请参考附表。 在细菌沉淀中加入700μL溶液A,充分吹打或涡旋振荡半分钟。 将裂解液全部转移到离心吸附柱中,直接离心。如果静置3~5分钟后再离心,会提高质粒产量10%左右。 室温14000g离心1分钟,弃穿透液。如果使用3~5mL起始菌液,则此步的离心时间可以延长1分钟以确保所有液体成功过柱,吸附柱中没有残留液体。 在离心吸附柱中加入700μL的通用洗柱液,室温14000g离心半分钟,弃穿透液。 室温14000g离心半分钟,甩尽残留液体。 注意:此步不能省略。 将离心柱置于一个自备的1.5mL塑料离心管中,在离心柱中加入30~50μL DNA洗脱液2.0(对低拷贝质粒建议用30μL洗脱,对高拷贝质粒建议用50μL洗脱)。
室温14000g离心半分钟,离心管底溶液即质粒DNA,可以直接用于后续实验(浓度测定、酶切、电泳和测序)或放冰箱长期保存。 |
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