上海莼试生物技术有限公司
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分子生物学试剂 > DNA提取纯化 > 核酸释放剂(用于DNA)
产品名称:
核酸释放剂(用于DNA)
型号:
CS-01F96531
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国产
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产品简介
核酸释放剂(用于DNA)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

英文名称

规格

货号

核酸释放剂(用于DNA)

Nucleic Acid Releaser

10mL

CS-01F96531

本产品专用于从各种常见的生物样品中快速提取用于核酸扩增的DNA样品。

产品特点:

1.单溶液,操作简单,只用一步(约5-10分钟)即可以得到用于核酸扩增的模板,不需要任何离心、抽提等操作步骤,比常用的Chelex100提取方法和/氯仿方法快。

2.可用于DNA模板。

3.跟各种后续实验兼容,包括PCRLAMP等。

4.兼容性广,可以用于几乎所有的分子生物学样品,包括细菌、昆虫、真菌、各种植物、各种动物、法医样品(包括全血液、血痕、精斑、唾液、毛发、组织样品、口腔细胞和FTA卡)、石蜡组织切片等。

5.环保健康,不使用任何有毒有害的试剂。

6.本产品只能用于科研,尤其适用于大规模育种筛选,不能用于临床。

7.本规格足够200次核酸扩增实验

保存条件:常温,有效期一年。

使用方法:

1.将约2μL液体样品(如全血、细胞培养液、病毒样品、粪便样品)或2mg(约半粒芝麻大小)的固体样品(如动物组织、植物叶片、种子等)加入到50μL本产品中。

注意:样品加入量可能需要根据其DNA的含量稍做调节,如果样品DNA含量少,则用量要增加,但总液体样品用量好不要过本产品用量的1/10;固体样品用量好不要过1mg/10μL的比例。

2.对液体样品,室温放置3分钟;对固定样品80℃加热5分钟;对难以破裂的样品(如有厚壁的真菌、石蜡组织切片、血斑),则保温时间可以延长到10-30分钟。

3.简短振荡混匀后取样品裂解液直接进行PCR扩增或其他扩增(裂解物体积好不要过反应体积的2/5,对50μL体系的扩增,加入的裂解液好不要过20μL。由于各扩增体系成分不同,跟本产品组合时好做梯度测试,即在50μL的扩增反应中分别加5μL10μL15μL20μL25μL样品裂解液进行测试)。

 

4.其余同常规操作。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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