使用方法：

一、样品溶液的制备

样品的pH值应在6.0–8.0 之间，若出此范围，需用无热原缓冲液或0.1N氢氧化钠、0.1N 盐酸调节。若样品中可能存在鲎实验的干扰物质，见本说明书4.2“样品的干扰实验”。若样品中可能含有导致鲎试剂中G 因子旁路反应的(1,3)β－D－葡聚糖，需选用不会对(1,3)β－D－葡聚糖起反应的特异性鲎试剂。

二：细菌内毒素标准溶液及对照液的准备

2.1细菌内毒素标准溶液(本试剂盒不提供)

 取细菌内毒素工作标准品1支，按《细菌内毒素工作标准品使用说明书》配制2λ ，1λ ,0.5λ,及0.25λ的一系列内毒素标准溶液(λ为鲎试剂灵敏度标示值)。备用。

 注：鲎试剂灵敏度复核实验见本手册其他常用实验方案。

2.2 阴性对照液：即无内毒素水。

2.3 阳性对照液：即浓度为2λ的内毒素标准溶液。

2.4样品阳性对照液：即添加浓度为2λ内毒素标准的样品溶液。

三：内毒素检测

3.1 鲎试剂的溶解：按标示量(本试剂盒为0.1mL/支)加无内毒素水于鲎试剂中，轻轻振摇使鲎试剂完全溶解。注意不要引起气泡，溶解后的试剂应在10 min内使用(即配即用)。

3.2样品溶液的制备

 样品大有效稀释倍数(MVD)的计算：

 MVD＝ C?L/λ

 λ：测试用鲎试剂灵敏度标示值(EU/mL)；L：样品细菌内毒素限值；C：样品浓度或样品复溶后所得样品浓度。当L 单位为EU/mL(溶液)时，C的单位为1mL/mL；当L单位为EU/mg或者EU/U时，C的单位为mg/mL或者U/mL。按照计算所得体积，加无内毒素水制备样品溶液。

3.3 各反应管中分别加入0.1mL 阴性对照液，阳性对照液，样品，或样品阳性对照液。

 封闭管口，轻轻摇匀，垂直放入37℃的恒温器中温育60分钟±2分钟，温育期间避免振动。

3.4 结果判断

3.4.1 将试管从恒温器中轻轻取出，缓慢倒转180°。若管内的内容物呈坚实凝胶，不变形，不从管壁滑脱为阳性，记录为(+)；不呈凝胶或虽生成凝胶但不能保持完整并从管壁滑脱为阴性，记录为(－)。

3.4.2 只有当阴性对照管结果均为阴性，阳性对照管、样品阳性对照管结果均为阳性，实验方有效，否则无效。若阴性对照管为阳性，提示鲎试剂、无内毒素水或实验器具可能受到污染。若阳性对照管为阴性，提示鲎试剂活性减失、内毒素标准溶液效价降低，鲎试剂的灵敏度或内毒素的效价标示不准确，或内毒素标准溶液的稀释不正确。若样品阳性对照管为阴性，提示反应体系内有干扰因素存在。