实验前准备及重要注意事项：

所有组分可在干燥、室温（15～30℃）环境稳定保存1年，将吸附柱置于2～8℃可保存更长时间，加入RNase A的Buffer P1置于2～8℃可稳定保存6个月。

次使用前，将RNase A溶液全部加入到Buffer P1中，混匀，置于2～8℃保存，使用前需在室温中放置一段时间，恢复至室温后使用。

次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇。

使用前若发现Buffer P2、Buffer N3、Buffer PB有沉淀，可在37℃水浴几分钟，即可恢复澄清（请勿剧烈晃动Buffer P2）。

注意不要直接接触Buffer P2、Buffer N3和Buffer PB，使用后应立即盖紧盖子。

提取质粒的量和纯度与细菌培养浓度、菌株种类、质粒大小、质粒拷贝数等因素有关。

操作步骤：

取1～5mL过夜培养的菌液加入离心管（自备）中，13000rpm（~16200×g）离心30秒收集菌体沉淀，尽量吸弃上清。

向留有菌体沉淀的离心管中加入250μL Buffer P1（请先检查是否已加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器充分混匀，悬浮菌体沉淀。

注意：如果菌块未彻底混匀，将会影响裂解效果，导致提取量和纯度偏低。

向离心管中加入250μL Buffer P2，温和地上下颠倒混匀4～6次，充分混匀使菌体裂解，此时溶液应变得清亮粘稠。

注意：温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片段。

此步骤所用时间应不过5分钟，避免质粒受到破坏。

向离心管中加入350μL Buffer N3，立即温和地上下颠倒混匀8～10次，充分混匀，此时应出现白色絮状沉淀。13000rpm离心5分钟。

注意：Buffer N3加入后应立即混匀，避免产生局部沉淀。

将步骤4中所得的上清液转移到已装入收集管的吸附柱DM中，13000rpm离心30秒钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

向吸附柱中加入150μL Buffer PB，13000rpm离心30秒。

向吸附柱中加入400μL Buffer PW（请先检查是否已加入无水乙醇），13000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。

将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附膜的中间部位加入50～100μL Buffer EB，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。-20℃保存质粒。

注意：

1）为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，室温放置2分钟，13000rpm离心1分钟，将质粒溶液收集到离心管中。

2）质粒拷贝数较低或＞10kb时，Buffer EB在65～70℃水浴预热，可以增加提取效率。