上海莼试生物技术有限公司
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分子生物学试剂 > DNA提取纯化 > 非冻型血液DNA保存液
产品名称:
非冻型血液DNA保存液
型号:
CS-01F96515
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产品简介
非冻型血液DNA保存液现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

英文名称

规格

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非冻型血液DNA保存液

DNAhold Blood DNA non-freezing preservation

250mL

CS-01F96515

本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液,它通过裂解细胞并高效抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。

产品特点:

1.保存时间长,可常温保存血液DNA长达六个月,尤其适合于野外血液样品采集。

2.DNA完整性好,纯化后长度在20-50 Kb之间。

3.DNA无化学修饰,提得的DNA可用于酶切、电泳、Southern杂交和PCR等分子生物学实验。

4.适用于各种动物血液(包括禽类血液)

5.安全可靠,本产品无毒无害。

6.使用简单,直接把新鲜的血液样品与本产品混合即可。

储存条件:室温运输及保存,有效期两年。

使用方法:

:哺乳动物血液(包括人血液)

1.将抗凝血(1-10mL)加入到适当容量的塑料离心管中。

2.加入等体积的血液DNAhold,充分振荡混合均匀。

3.常温闭光保存直到使用。

4.提取DNA时,可以取出部分液体,用自备的蛋白酶K(终浓度为0.1mg/mL)37℃处理过夜,然后再用经典的酚/氯仿抽提+乙醇沉淀方法得到DNA

:禽类血液

 

由于禽类血液有核细胞量远高于哺乳动物,血液的使用量很少,一般只有哺乳动物血液用量的1/1001/1000,所以需先用等体积的水将血液DNAhold稀释,然后直接将禽类血液加入。其余操作同上。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签:非冻型血液DNA保存液 250mL 

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