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产品名称:
一管式病毒DNA-RNA提取试剂盒
型号:
CS-01F96507
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国产
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产品简介
一管式病毒DNA-RNA提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

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一管式病毒DNA-RNA提取试剂盒

One-tube virus RNA-DNA extraction kit

50

CS-01F96507

本试剂盒是整合一管式病毒和一管式病毒RNA提取试剂盒两产品而得,专门用于从血清(血浆)等液体样品中同时提取病毒DNA(HBV DNA)和病毒RNA(HCV RNAHIV RNA)的产品。本产品灵敏度高,稳定性好,使用简单快捷,尤其适合于整合到临床PCRRT-PCR 检测试剂盒中。

试剂盒特点:

1. 回收率高,可以达到90%以上,高于绝大部分基于离心柱的提取方法。可以跟QIAGEN的同类产品媲美。

2. 灵敏度高,通过PCR 检测到病毒DNA的终灵敏度可以达到30 拷贝/mL样品,通过RT-PCR 检测到病毒RNA的终灵敏度可以达到50 拷贝/mL样品。

3.一管式操作,减少了样品污染的可能。

4.一站式套装,除样品外客户不需要准备任何试剂,降低了实验误差。

5. 安全无毒,不需要使用和氯仿等有机溶液。

6.处理量大,如果加上病毒离心富集步骤,多可以处理1.5mL液体病毒样品。

7.PCR、荧光PCRRT-PCR、荧光RT-PCR等后续反应兼容。

储存条件:常温运输,溶液A4℃保存,溶液B和溶液C室温保存,有效期一年。溶液B和溶液C具有挥发性,使用后需要将瓶盖拧紧。

使用方法:

1. 0.1-0.2mL液体样品转移到1.5mL 旋盖离心管中。如果需要富集样品中的病毒,可以先将1.5mL液体样品转移到1.5mL 旋盖离心管中,然后4 24,000 g离心60分钟,移弃1.3mL上清液后继续操作下一步的操作。

2. 加入0.6mL溶液A,盖上盖子后振荡3-5秒。

注意:溶液A用前需37-65℃水浴融化并充分摇匀后方可使用。

3.室温静置10分钟。

4. 加入0.6mL溶液B,盖上盖子后振荡3-5秒。

5. 15000g室温离心15分钟。烈建议在离心管管壁上用记号笔做简单标记以区别离心面和向心面。

6.小心移弃上清。注意不要触及管底的DNARNA沉淀。

7. 加入1.0mL溶液C,振荡数秒后15000g室温离心5分钟。注意:将离心管放入离心机时一定要离心面向外。

8. 移弃上清,注意不要触及管底的DNARNA沉淀。

9. 短暂离心数秒,注意:将离心管放入离心机时一定要离心面向外。

10.小心移弃残留上清(残留的溶液C会影响后续反应)。此时离心面的管壁上将有可见的膜状沉淀。

11. 加入100-200μl溶液D,用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁的膜状沉淀,使其溶解。溶解液混浊或有少量不溶物是正常现象。不要离心只取上清使用,因为不溶沉淀物中含有DNARNA,必须取混合液使用(哪怕很浑浊)

 

12. 直接取适量样品用于PCRRT-PCR,也可短期保存于-20℃或-80℃。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。产品仅用于科研
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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