RNA/DNA/蛋白提取试剂盒CS-01F96488_上海莼试生物技术有限公司

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一、概述：

产品属性：

产品名称	英文名称	规格	货号
RNA/DNA/蛋白提取试剂盒	All-In-One RNA/DNA/Protein Mini Extraction Kit	50次	CS-01F96488

本试剂盒可从同一样品中同时提取总RNA、基因组DNA和蛋白。DNA、RNA和蛋白提取前无需将样品分离。可从培养的真菌细胞、动物和植物组织中提取DNA、RNA和蛋白。

本试剂盒提供了一套独特的缓冲液系统和硅胶膜核酸纯化吸附分离柱技术，可分离纯化出基因组DNA和总RNA。无需/氯仿抽提。纯化的DNA可应用于限制性内切酶消化、PCR和其他后续分子生物学实验。提取的总RNA可用于mRNA分离、探针制备、RT-PCR、Northern blot、引物延伸、RNA酶保护实验和体外翻译等。

蛋白被一种能有效沉淀蛋白质的特殊缓冲液（PP Solution）以变性的形式纯化出来。洗涤步骤后，蛋白沉淀溶解于PD Solution。提取的蛋白可用于SDS-PAGE、Western Blot分析和定量。操作简单快速。不到1h时间内即可提取出基因组DNA、总RNA和蛋白质。

试剂盒特点：

可同时提取出样品的基因组DNA、总RNA和蛋白质，时间不到1h。

提取的基因组DNA质量高，分子量≥20kb。

提取的总RNA质量高，无基因组DNA污染。

分离出的蛋白适用于SDS-PAGE和Western Blot分析。

得率高，重复性好。

无需/氯仿抽提或乙醇沉淀。

保存条件：室温（15-25℃）干燥

用户需自备的材料：

离心速度至少达到12000g的小型离心机

RNase-Free的移液枪和枪头

涡旋混合器

RNase-Free的乙醇(96-100%)

50%乙醇

RNase-Free离心管(1.5mL)

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作步骤:

1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签：RNA/DNA/蛋白提取试剂盒 50次

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