上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
RNA快速纯化试剂盒
型号:
CS-01F96475
生产地址
国产
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产品简介
RNA快速纯化试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

英文名称

规格

货号

RNA快速纯化试剂盒

RNA Fast Purification Kit

10T|50T

CS-01F96475

本试剂盒可在5分钟内快速完成RNA纯化操作,回收率可高达7095%。该试剂盒采用高特异吸附能力的硅胶吸附柱,应用优化好的特定缓冲液,可选择性地结合回收目标RNA,并去除杂蛋白、盐等。该试剂盒每次可纯化得到高达50μgRNA片段(>15nt),回收的产物可直接用于RT-PCR、用于NGSRNA文库制备、基因编辑、显微注射、RNA标记、转染等。

产品特点:

用时短:可在5min内完成RNA的纯化。

高纯度:该试剂盒采用高特异性吸附柱式纯化,大程度的去除蛋白和盐等杂志的污染。

适用性广:适用于提取获得的RNA、体外合成的RNA、体外合成的sgRNA等多种RNA的纯化。

操作极简化:只需将样品与Binding Buffer和无水乙醇混合,经一步挂柱和洗脱即可获得高纯度RNA

使用方法:

50μL待回收样品中加入100μL RNA Cleanup Binding Buffer用枪头吹打混合均匀。

注意:若样品不足50μL需加入RNase-Free H2O补至50μL;若样品大于50μL则可按比例缩放缓冲液体积,当样品大于150μL时应上两根吸附柱。

向上述溶液中加入预冷150μL无水乙醇(等体积),枪头吹打混合均匀。(当25nt

将上述溶液共300μL加入到吸附柱中,室温静置30s4 13000rpm离心30s,弃去过柱液。

向吸附柱中加入预冷的700μL 75%乙醇,413000rpm 30s,弃去过柱液,重复此步骤一次。

13000rpm空离2min后,将吸附柱转移至新的1.5mL收集管中,室温放置2min使残留乙醇挥发。

向吸附柱芯中加入50100μL RNase-Free H2O,室温静置1min后,4 13000rpm离心2min,获得的产物即为纯化的RNA。可立即使用或于-80℃保存。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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