上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
血液总RNA高效提取试剂盒
型号:
CS-01F96466
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产品简介
血液总RNA高效提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

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血液总RNA高效提取试剂盒

High efficiency extraction kit for total RNA from blood

50

CS-01F96466

本试剂盒可从新鲜全血中高效提取总RNA,可处理不同物种以及多种抗凝剂全血样品。吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料,高效、专一吸附RNA,可大限度去除杂质蛋白。提取的RNA可用于RT-PCRReal Time RT-PCR、芯片分析、高通量测序、Northern BlotDot BlotPoly A筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等多种下游实验。

产品特点:

适用于不同物种新鲜全血,操作简单。

配有CS过滤柱,可有效去除杂质。

精心配置的缓冲液,保证RNA提取高效稳定,适用于多种下游实验。

操作安全可靠,无需酚/氯仿抽提。

保存条件:室温(1525℃)保存,DNaseI,缓冲液RDD28℃保存,加入β-巯基乙醇的裂解液RLH 4℃可放置一个月

自备试剂:

β-巯基乙醇、无水乙醇

预防RNase污染

经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase污染。

使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。

RNA在裂解液RLH中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h,塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase

配制溶液应使用RNase-free ddH2O。(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%V/V),混匀后放置过夜,高压灭菌。)

注意事项:

操作前在RLH中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1mL RLH中加入10μL β-巯基乙醇。此裂解液好现用现配。配好的RLH 4℃可放置一个月,裂解液RLH在储存时可能会形成沉淀,如果有沉淀出现,请加热溶解后使用。

次使用前应在漂洗液RW与去蛋白液RW1H中加入无水乙醇,加入量请参见瓶上标签。

人类的血液或体液可能有潜在的感染性,所以如果对人类的全血进行处理,请注意做好防护措施。

本试剂盒多能处理1.5mL健康的人类全血(健康人的全血中白细胞含量为:多40007000个白细胞/μl血液),如果血液中白细胞的含量较高,可按比例减少血液的用量,本试剂盒多可处理的白细胞数量为:1×107

在白细胞裂解后,该说明书中的所有步骤需在室温(1525)进行,操作速度越快越好。

细胞溶解物(在裂解液RLH)可以存放在-70℃,待使用时,将其置于37℃孵育10min,以保证所有的盐都溶解,然后进行操作步骤第7步。

本试剂盒不适用于冻存的全血。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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