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产品名称:
多酚多糖植物总RNA提取试剂盒
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CS-01F96463
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多酚多糖植物总RNA提取试剂盒现货供应,价格实惠。
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一、概述:

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多酚多糖植物总RNA提取试剂盒

Total RNA Extraction kit from the plant in which polyphenols and polysaccharides are rich

50

CS-01F96463

本试剂盒可从植物组织,特别是富含多糖多酚或淀粉的植物组织(如棉花叶片,成熟水稻叶片,拟南芥种子,白松松针,香蕉,枇杷叶片,马铃薯块茎,苹果,梨,西瓜果肉,猕猴桃,月季,烟草,沙棘,百合等)中快速提取总RNA,可同时处理大量不同样品。提取的总RNA纯度高,没有基因组、蛋白和其它杂质的污染,可用于RT-PCRReal Time RT-PCR、芯片分析、Northern BlotDot BlotPolyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等多种下游实验。

产品特点:

·针对性:专门针对多糖多酚等难提植物样本独特配置,流程更优化,结果有保障。

·高效去除基因组:配有高效DNase I,可在柱上快速去除gDNA

·简便快捷:仅需1小时即可完成RNA提取实验。

·安全低毒:无需酚和氯仿等毒性有机试剂。

保存条件:室温(15-25)保存。RNase-Free DNase I,缓冲液RDDRNase-Free ddH2O(管装)置于2-8℃保存;加入β-巯基乙醇的裂解液SL 4℃可放置一个月。

预防RNase污染,应注意以下几方面:

1.经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase污染。

2.使用RNase-Free的塑料制品和枪头避免交叉污染。

3RNA在本制品中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用RNase-Free的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h,塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase

4.配制溶液应使用RNase-Free ddH2O。(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%V/V,放置过夜,高压灭菌)。

注意事项:

1.操作前在SL中加入β-巯基乙醇至终浓度5%,如475μl SL中加入25 μl β-巯基乙醇。此裂解液好现用现配。配好的SL 4℃可放置一个月,裂解液SL在储存时可能会形成沉淀,如果有沉淀出现,请加热溶解后使用。

2.植物组织裂解是否充分直接影响到RNA提取的质量和产量,本试剂盒中提供的裂解液SL,适用于大多数植物组织的裂解,但有些植物组织(例如玉米的乳白色胚乳,红豆种子或小麦种子)或丝状真菌,由于次级代谢产物较特殊,异硫氰酸胍使样品产生沉淀,导致RNA提取效果不佳的现象,购买试剂盒时请提醒我司业务人员更换另一种裂解液HL,将解决该问题。

3.次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇,加入量请参见瓶上标签。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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