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产品名称:
微量样本总RNA提取试剂盒
型号:
CS-01F96460
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产品简介
微量样本总RNA提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

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产品名称

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微量样本总RNA提取试剂盒

Total RNA Extraction Kit from trace sample

50

CS-01F96460

本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统,可从多种不同类型的微量样品中快速提取总RNA。本试剂盒特别加入了Carrier RNA,可以从体系中轻松捕获微量核酸,具有方便快捷、产量高、重复性好的特点,30-40分钟内即可完成反应。与其它提取RNA的普通方法相比,微量样品RNA提取试剂盒将所有<200bpRNA5.8S rRNA,5S rRNAtRNAs等)选择性的筛除,而所有>200bpRNA则被富集、分离和纯化。提取的总RNA纯度极高,没有DNA和蛋白质污染。

本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统,可从多种不同类型的微量样品中快速提取总RNA。本试剂盒特别加入了Carrier RNA,可以从体系中轻松捕获微量核酸,具有方便快捷、产量高、重复性好的特点,30-40分钟内即可完成反应。与其它提取RNA的普通方法相比,微量样品RNA提取试剂盒将所有<200bpRNA5.8S rRNA,5S rRNAtRNAs等)选择性的筛除,而所有>200bpRNA则被富集、分离和纯化。提取的总RNA纯度极高,没有DNA和蛋白质污染。

产品特点:

·从微量的样本中纯化得到的高质量的RNA,如显微切割得到的组织,纤维组织和细胞。

·配有高效的DNase Ⅰ,可有效去除DNA污染。

· RNA纯度更高,无杂质残留,特别适合于对纯度要求很高的下游实验。

·操作安全可靠,无需酚/氯仿抽提,无需氯化铯梯度离心,无需氯化锂或乙醇沉淀。

储存条件:在室温(15-25)条件下运输,收到试剂盒后,请立即将RNase-free DNase I,缓冲液RDDRNase-free ddH2O置于2-8℃保存,其他试剂可置于室温(15-25)保存。

选配试剂:蛋白酶K(目录号:WH0215);研磨杵(目录号:WH9004);过滤柱CS:(目录号:RK124

自备试剂:β-巯基乙醇、无水乙醇

使用前注意事项:

1.为了防止RNA的降解,请避免未处理的样品在室温长时间放置,在组织固定前,RNA处于无保护状态,所以请将组织在液氮中速冻。

2.组织裂解液(在裂解液RL中)可在-70℃储存数月。处理冻存的裂解液时,可在室温或37℃水浴中将样品完全解冻,而且请注意裂解液中的盐需要完全溶解,之后立即进行后续操作。(长时间37℃处理将会导致RNA的化学降解)。

3.所有步骤在室温进行,为了尽量避免RNA的降解,操作越快越好。

4.在使用前,请用RNase-Free ddH2O配制乙醇溶液。

5.操作前在RL中加入β-巯基乙醇至终浓度1%,如1ml RL中加入10μl β-巯基乙醇。此裂解液好现用现配。配好的RL可在4℃放置一个月,裂解液RL在储存时可能会形成沉淀,如果有沉淀出现,请加热溶解后使用。

6.次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇,加入量请参见瓶上标签。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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