上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
总RNA强效提取试剂
型号:
CS-01F96455
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国产
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产品简介
总RNA强效提取试剂现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

英文名称

规格

货号

RNA强效提取试剂

Total RNA Extraction Reagent

100ml

CS-01F96455

本制品具有裂解能力更,灵敏度更高等特点。可用于从细胞和组织中提取出总RNA,在样品裂解或匀浆过程中,本制品可保持RNA完整性,同时裂解细胞,溶解细胞内含物。

本制品既适用于小量样品(50-100mg组织、5×106细胞)的总RNA提取,也可用于大量样品(≥ 1g组织或≥107细胞)的总RNA提取。对人、动物、植物组织提取都适用,同时可处理病毒样本、血清、体液等液体材料。1h内即可完成反应,提取的总RNA没有DNA和蛋白的污染,可用于RT-PCRNorthern blot和分子克隆等下游实验。

产品特点:

·改良的裂解液配方,特别适用于低含量样本、液体材料和病毒材料。

·裂解能力更,提取灵敏度更高。

·适应材料广泛。

储存条件:2-8℃避光保存12个月。

自备试剂:氯仿、异丙醇、RNase-free ddH2O75%乙醇(用RNase-free ddH2O配制)。

预防RNase污染,应注意以下几方面:

1.经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase污染。

2.使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。

3RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h,塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase

4.配制溶液应使用无RNase的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%V/V),放置过夜,高压灭菌。)

使用前注意事项:

1.匀浆后,加氯仿前,样品可在-70℃放置一个月。

2RNA沉淀可以保存在75%乙醇中,2-8℃一个星期以上或-20℃一年。

3.若提取细菌RNA,推荐应用培养细胞/细菌总RNA提取试剂盒

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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