上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
病毒基因组快速提取试剂盒
型号:
CS-01F96426
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病毒基因组快速提取试剂盒现货供应,价格实惠。
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一、概述:

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病毒基因组快速提取试剂盒

Nucleic acid rapid extraction from virus

50

CS-01F96426

本试剂盒采用特异性结合病毒DNA/RNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统,病毒DNA/RNA提取试剂盒适合于从无细胞体液,包括血浆、血清、腹水、培养细胞上清液、脑脊髓液及尿液等中快速提取高纯的病毒DNA/RNA。该产品可以满足绝大多数的病毒RNA/DNA的同时提取要求, 如病毒RNAHCV(丙肝病毒),HIV(艾滋病毒),HTLV(人类嗜T淋巴细胞病毒); 病毒DNAHBV(乙肝病毒)和CMV(巨细胞病毒)等等。病毒裂解后,DNA/RNA后在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除,后低盐的洗脱缓冲液将纯净的病毒DNA/RNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的病毒核酸无杂质和PCR抑制剂,可直接适用于PCR/RT-PCR分析。

试剂盒组分:

裂解液VLB————————20 ml

去蛋白液RE———————25 ml

漂洗液RW————————10 ml

RNase-free H2O—————10 ml

吸附柱和收集管————50

产品特点:

1.不需要使用有毒的等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。

2.节省时间,简捷,单个样品操作一般可在20分钟内完成。

3.多次柱漂洗确保高纯度,提取的病毒DNA/RNA 纯度高,质量稳定可靠,可适用于各种常规操作,包括PCR/RT-PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。

操作步骤:

提示:次使用前请先在10ml 漂洗液RW 中加入40ml 无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!

1. 200μl 血清等体液(需回复到室温,不足可用0.9% NaCl 或者PBS 补足)转入上述1.5ml 离心管,加入400μl 裂解液VLB, 立刻涡旋振荡充分混匀。

2. 室温(15-25)放置10 分钟,每隔5 分钟,振荡混匀一次。

3. 加入450μl 无水乙醇,立刻涡旋振荡充分混匀。如果周围环境高于25,乙醇需要冰上预冷后再加入。

4. 将上述混合物加入一个吸附柱 中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm 离心30-60 秒,倒掉收集管中的废液。如果总体积过750μl,可分两次将溶液加入同一个吸附柱中。

5. 500μl 去蛋白液RE12,000rpm 离心30 秒,弃废液。

6. 加入500μl 漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30 秒,弃废液,加入500μl 漂洗液RW,重复一遍。

7. 将吸附柱 放回空收集管中,13,000rpm 离心2 分钟,尽量除去漂洗液, 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

储存条件:室温,有效期12个月。

本制品别名:病毒|病毒RNA提取试剂盒|病毒核酸提取试剂盒

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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