上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
样品RNA保存液
型号:
CS-01F96425
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国产
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产品简介
样品RNA保存液现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

英文名称

规格

货号

样品RNA保存液

RNA Sample preservation solution

50ml|100ml

CS-01F96425

 

本品适用于动物组织(心,肝,肾,肌肉,睾丸,脑,脾等)、培养细胞、RNA病毒、果蝇、细菌、白细胞、全血、一些植物组织等。

本品是一种水相的,无毒的组织保存液体,可以迅速渗入新鲜组织细胞的胞浆中,在非冻状态下原位稳定和保护细胞内的RNA。取下组织薄片后立刻浸入本品保存并不影响将来提取RNA的质量和数量。本品消除了RNA样品需要立刻处理或者必须液氮保存的不方便。浸入本产品后,新鲜组织细胞中RNA可以完好的在37℃下保存一天,在25℃下保存一周,4℃下保存一个月,在-20℃或-80℃下长期保存。RNA病毒样品(HCVHIV)可在37℃保存一个月。

产品特点:

1.操作容易:将成适当大小,浸没在本品中即可使其RNA不被降解。

2.无需液氮:使样品的保存不需液氮,干冰或-80℃冰箱,尤其适用于临床和野外样品的快速和大规模采集。

3.方便运输:处理过的样品能在25℃保存一周,使样品邮寄和运输变得容易和便宜,有利学术合作和交流。

4.多次冻融:经本品处理的样品可反复冻融多次,其间可对样品进行各种处理而不影响终提取的RNA的质量。

5.比性:本品能减少大规模样品处理中的误差,增加各次实验数间的可比性,对大规模基因表达谱的分析尤其有用。

6.兼容性广:多种总RNA提取试剂都可以用来提取保存在本品内的样品。还可直接用于组织切片,免疫学和流式细胞分析而不影响RNA提取的质量。

使用方法:

本品只用于新鲜组织,浸泡入本品前禁止冷冻组织。只需要迅速将新鲜成长,宽,高任意一边厚度<0.5厘米浸泡入本品即可(只要有一边厚度不过0.5厘米,本品可以迅速渗透,其它两边的尺寸并不重要)。将新鲜组织浸泡在5倍体积的本品中,按照指示存放在适当的温度。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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