上海莼试生物技术有限公司
热卖产品最新促销最新推荐
分子生物学试剂 > RNA提取纯化 > RNA保存液(长期保存RNA)
产品名称:
RNA保存液(长期保存RNA)
型号:
CS-01F96422
生产地址
国产
产品价格
电议
产品简介
RNA保存液(长期保存RNA)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

英文名称

规格

货号

RNA保存液(长期保存RNA)

RNA long-term preservation solution

2ml

CS-01F96422

本品可以允许RNA4℃过夜或-20℃保存至少年而免于降解。RNA 长期保存液是RNA 样品运输和中长期保存的佳选择。需要时可用常规乙醇法沉淀回收RNA,或直接吸取储存于RNA 溶解保护液中的高浓度RNA(可达4 mg/ml)进行RNA 电泳、Northern Blot

RNA长期保存液溶解RNA沉淀:

1. 对固体RNA 沉淀,每0.4-4μg RNA 沉淀加入1μl RNA 长期保存液,反复吹打混匀或者室温振荡15-30 分钟溶解沉淀。干燥的RNA 沉淀难以溶解,可反复吹打混匀后50℃加热10-15 分钟。好先用小体积无RNase TE 或水溶解RNA沉淀,然后按液态RNA 操作。

2. 对液态RNA 溶液,每0.4-4μg RNA 溶液加入1μl RNA 长期保存液,混匀。注意混合液中RNA 长期保存液的体积百分比不低于80%

3. 测定OD 值。注意加入相应量的RNA 长期保存液做空白。

4. 将溶解的RNA 样品储存于-20℃或者-70 oC

RNA长期保存液中沉淀RNA

1. 估计RNA 溶液终体积。加入4 倍体积的无水乙醇,混匀。如果溶液体积过小操作不便,可加入RNase free water 稀释RNA 溶液,如果溶液中RNA 含量低于

0.25μg/μl,可加入5M NaCl(RNase free) 至终浓度0.2M,混匀,然后再加入4 倍体积乙醇。

2. 室温放置5 分钟。

3. 12000rpm5 min。弃上清。风干,溶解。

4. 重新沉淀的RNA 溶解后可用于RT-PCR 反应。也可用于任何其他实验。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签:RNA保存液(长期保存RNA) 2ml 

联系我们

联系人:高小姐

手    机:13585831301

Q      Q:3004967995

座    机:021-59541103

传    真:021-60443211

地    址:上海嘉定区嘉罗公路1661