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产品名称:
冰冻动植物组织RNA稳定-过渡溶液
型号:
CS-01F96413
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冰冻动植物组织RNA稳定-过渡溶液现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

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冰冻动植物组织RNA稳定-过渡溶液

ICE Tissue Stabilizer

100ml

CS-01F96413

本品是一种新型的冰冻组织过渡溶液,可以帮助解冻冰冻组织,同时保护RNA完整性,从而可以使冰冻组织转变到普通的匀浆方法易于处理的状态,以提取高质量的RNA。处理后的冰冻组织不需要在匀浆前将其碾磨成粉,甚至在匀浆前可以进一步对组织进行切割。加入RNAKeeper-ICE溶液后,组织从坚硬的冰冻状态转变为柔软状态,此时该溶液渗入组织,使RNA酶失活。用本品溶液处理后,组织可以在室温下操作而不用担心RNA会发生降解。而且,样品能被安全的称重,进一步切割,或者进行多种实验而不影响RNA的质量。处理后的组织样品可以直接加入到裂解溶液中破碎,也可以置于-20℃长期保存。

本产品适用于动物组织以及培养细胞、白细胞。经测试,可用于肝、肾、脾、肺、心、胸腺、胰等组织的保存。

本产品与基于异硫氰酸胍的RNA提取试剂如Total RNA Extraction Reagent, Trizol,或基于离心柱的RNA提取试剂盒兼容。

应用实例

1. 将本品在-70℃或-80℃预冷。

2. 样品保存:

A.动物组织:按100 mg组织比不小于1 ml 本品的比例,将冰冻组织浸没于预冷的本品中。注意:组织块的厚度应不过0.5 cm,否则会影响本品的渗透效率,导致RNA稳定效果变差。

B.培养细胞、白细胞:收集细胞,用PBS清洗后加入至少10倍体积本品,盖紧管盖,上下颠倒数次。此时沉淀是否被完全悬浮对实验无影响。

3. 将浸没于本品的组织转移至-20℃存放。至少16小时后,组织即可匀浆进入后续提取过程;若不立即匀浆,组织可继续在-20℃稳定存放6个月。这个过程中,组织可从溶液中取出,在室温进行切割、称重等操作(注意在室温暴露的时间不要过30分钟)后继续浸没在本品中保存。

4. RNA提取:将组织取出,用镊子轻轻挤掉多余的本品溶液,置于裂解液中,立刻匀浆。如果是细胞样品,10000g4℃离心1分钟,弃上清,加入裂解液。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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