上海莼试生物技术有限公司
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分子生物学试剂 > RNA提取纯化 > 总RNA提取试剂(同Trizol)
产品名称:
总RNA提取试剂(同Trizol)
型号:
CS-01F96412
生产地址
国产
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产品简介
总RNA提取试剂(同Trizol)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

英文名称

规格

货号

RNA提取试剂(Trizol)

Total RNA Extraction Reagent

100ml

CS-01F96412

本产品是一种用于各种动植物、细菌组织/细胞总RNA抽提的试剂,具有的裂解能力,可在短时间内裂解细胞和组织样本,保持样品中RNA的完整性,有效抑制RNA的降解。样品在该试剂中能够充分被裂解,在加入氯仿离心后,溶液会形成上清层、中间层和有机层 (鲜红色下层)RNA分布在上层水相中,收集上清层后,经异丙醇沉淀便可回收得到Total RNA。提取的总RNA纯度高,基本不含蛋白质及基因组DNA 可直接用于Northern、点杂交、mRNA纯化、体外翻译、RT-PCRpoly(A)+选择、RNA酶保护分析以及构建cDNA文库等多种分子生物学实验。

此外,在除去水样层后,样品中的DNA和蛋白也能相继以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的DNA,在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。

本品操作简单快速,所有操作可以在一小时内完成。且对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(1g)和细胞(>107)均有较好的裂解效果。

注意事项

1)需自备氯仿、异丙醇(新开封或提取RNA专用)、75%乙醇 (DEPC水配制)DEPCDEPC水。

2)戴一次性干净手套;在单独的洁净的区域操作;在操作过程中避免讲话,以防实验者汗液、唾液中的RNase的污染。

3)请尽量使用RNase free的实验器具,包括枪头和离心管。耐高温器物可150℃烘烤4小时以去除RNA酶,其它器物去除RNA酶可考虑用0.1% DEPC水浸泡过夜,然后灭菌,烘干。溶液需用DEPC水配制。RNA实验用的器具和试剂应专门使用,不要用于其它实验。DEPC水建议分装后保存。

4)本产品中含有,具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会中毒、导致灼伤以及其他身体伤害。使用本产品时应穿戴防护物品,如装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛时,应立即用大量的水冲洗以及前往医院治疗;

5)样品用Total RNA Extraction Reagent 匀浆后,如果不即刻加入氯仿进行下游实验,可先于-70℃下冻存,可保存一个月以上。另保存在75%乙醇中的RNA沉淀,可于4℃保存1周,-20℃保存1年。

6RNA半衰期比较短,易降解,建议抽提后尽快进行后续实验。

储存条件:4℃,避光,有效期一年。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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