背景资料：

DNase I一种发现于多种细胞和组织的核酸酶，属核酸内切酶，靶向切割邻近的磷酸二酯键，产生5’端为磷酸基团、3’端为羟基的多聚核苷酸，平均消化产物小为多聚四核苷酸。DNase可催化多种形式DNA，如单链DNA、双链DNA，甚至染色质（其切割速率受组蛋白影响）。佳的工作范围是pH7～8，DNase的活性依赖于Ca2+，并可被二价金属离子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保护酶使其不被水解。在Mg2+存在下，该酶可随机识别和切断DNA任一条链上的任意位点；而在Mn2+存在的条件下，可同时识别DNA的两条链并在几乎相同的位点进行切割。DNase I早从牛中分离而来，至今哺乳动物也是该酶的主要的来源之一。

单位定义：

25℃，pH5.0条件下DNase催化底物DNA，使每毫升每分钟ΔA260增加0.001的变化定义为一个酶活力单位（Kunitz unit）。

失活抑制：

加入EDTA至终浓度为2.5mM后，65℃加热10min可使DNase Ⅰ失活。酚氯仿抽提也可以使DNase I失活。金属离子螯合剂，达到毫摩尔/升浓度的锌离子，0.1%的SDS，DTT、巯基乙醇等还原剂，50～100mM以上盐浓度均对DNase Ⅰ有显著抑制作用。

使用方法：

一、应用于蛋白提取实验

反应体系：蛋白提取液中按照1/100体积加入DNase I储存液（使其终浓度为20U/mL），1/100体积加入1M MgCl2。

反应条件：37℃，30～60min。继续后续蛋白提取实验即可。

注：由于EDTA能螯合酶活性需要的Ca2+和Mg2+，蛋白初始裂解液中要去除EDTA，否则会降低DNase I的消化能力。