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全血microRNA提取试剂盒 | miR-Quant microRNA Extraction Kit From Blood | 25T|100T | CS-01F96403 |
本试剂盒适用于冻存和新鲜的抗凝全血样本中提取血液中小RNA(<200nt),具有操作步骤简单、重复性好、产率较高的特点。核酸提取的成功与否、提取质量的好坏对后续实验起着至关重要的作用。使用TRIzol试剂提取总RNA,对总RNA中包含的部分小RNA进行研究,该方法的缺点是总RNA中microRNA的比例较小,同时由于mRNA的干扰,会导致后续反转录和RealTime PCR实验效率很低,很难获得理想的实验结果,且结果不可靠。在探索miRNA分子功能的过程中开发的全血miRNA提取试剂盒,通过一步上柱即可获得纯度高达98%的不含大RNA的miRNA,而且可在45分钟内完成小RNA的提取。每150μL全血可获得~1μg的microRNA。
保存:室温可保存2年。
注意:miRNA Reagent A溶液中含有胍盐,其具有烈的腐蚀性,试验时请务必佩戴防护眼镜、手套、口罩等防护措施,如有皮肤接触请立即用大量清水冲洗,再另行就医。 自备试剂: 异丙醇、乙醇、75%异丙醇 操作方法: 向1.5mL EP管中加入300μL miRNA Reagent A。将150μL抗凝全血加入到上述300μL miRNA Reagent A中,立即手腕用力震荡混合均匀。室温静置5分钟以充分裂解细胞。 向上述裂解完毕的裂解液中加入250μL miRNA Reagent B,上下颠倒混合均匀。13000rpm离心5分钟,吸取550μL上清液,转移到新的1.5mL EP管中。 向上述溶液中加入200μL无水乙醇,手腕用力震荡数次,室温放置5分钟。 13000rpm离心10分钟,转移700μL上清液到新的1.5mlEP管中。 向上述溶液中加入300μL异丙醇,手腕用力上下颠倒数次。 分两次将上述溶液倒入到miRNA吸附柱中,13000rpm离心1分钟,倒掉过滤液。 向吸附柱中加入700μL 75%异丙醇洗涤一次,13000rpm离心1分钟,倒掉过滤液。 向吸附柱中加入500μL无水乙醇洗涤一次,13000rpm离心1分钟,倒掉过滤液。 吸附柱13000rpm空离心2分钟,去掉残留的乙醇。 将吸附柱放入到新1.5mL EP管中,室温放置2分钟,使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入30μL RNase-Free TE Buffer,室温静置2分钟,13000rpm离心2分钟,洗脱产物即为提取的miRNA。 |
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