上海莼试生物技术有限公司
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产品名称:
血清miRNA提取试剂盒
型号:
CS-01F96390
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国产
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产品简介
血清miRNA提取试剂盒现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

产品名称

英文名称

规格

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血清miRNA提取试剂盒

Serum microRNA Extraction Kit

50

CS-01F96390

本试剂盒采用独特的裂解液迅速直接裂解血清血浆RNA酶,烈有机抽提去除蛋白和DNARNA包括微小分子RNA在高浓度乙醇下吸附于离心柱内特殊硅基质膜, 再通过一系列特殊漂洗液快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质进一步去除, 后低盐的洗脱液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

近年来对RNA干扰和调节性小RNA的广泛研究迫切需要一种能有效提取1530核苷酸左右大小RNA(包括siRNAmiRNA)的试剂盒。但是传统的RNA提取方法如硅胶膜不能有效吸附回收,酚/胍抽提和异丙醇或者乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA,对于血清、血浆样本更是由于其自身特点更难提取。本试剂盒的出现很好的解决了这一问题

产品组分:

Lysis buffer————避光50 ml

Wash Solution 1————12 ml(次使用前加入28ml 无水乙醇)

Wash Solution 2/3————10 ml(次使用前加入42ml 无水乙醇)

RNase-free H2O————10 ml

吸附柱和收集管————50

产品特点:

1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2.也不需要乙醇沉淀等容易丧失微小分子RNA的步骤。

3.特殊的裂解液配方,可以处理更多的血清/血浆样品。

4.多次柱漂洗确保高纯度,可用于RNAiRT-PCRNorthern-blot和各种实验。

注意事项

1. 次使用前请先在Wash Solution 1 瓶和Wash Solution 2/3 瓶中加入量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!

2. 除说明外,所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm 的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

3. 需要自备乙醇,氯仿。

4. Lysis buffer Wash Solution 1 含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5. RNA 纯度及浓度检测:

一般情况下通过测量OD260 值可以知道RNA 产量,测量OD260/OD280 比值可以是衡量蛋白质污染程度的指标之一,但是由于血清/血浆的RNA 含量特别低,已经低于分光光度计测量的下限,无法测量准确,因此一般无法通过测量OD 值或者比值的方法来判断纯度或者浓度,只能通过下游做荧光定量RT-PCR 来判断产量。同时无细胞的血清/血浆中的RNA 主要是小于100 nt 的小RNA,因此传统的电泳检测RNA 完整性并不适用于血清/血浆RNA

储存条件:室温,有效期6个月。(lysis buffer4℃避光保存)

本制品别名:血清miRNA分离试剂盒|血清miRNA纯化试剂盒|血清microRNA分离试剂盒|血清microRNA纯化试剂盒|血清microRNA提取试剂盒|血清总RNA提取试剂盒

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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