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石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒 | Paraffin Embedded Tissues microRNA Extraction Kit | 50次 | CS-01F96386 |
本试剂盒用于快速从福尔马林固定、石蜡包埋组织样品中提取RNA包括microRNA。独特的裂解液/蛋白酶K迅速裂解细胞释放出RNA,然后裂解混合物通过一个基因组DNA清除柱,基因组DNA被清除而RNA穿透滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, 后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。得到的RNA可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
产品组分: 裂解液——————15ml 结合液——————25 ml 漂洗液——————10ml 蛋白酶K——————20mg(可选) RNase-free H2O——————10ml 基因组DNA清除柱和收集管——————50套 RNA吸附柱和收集管室温——————50套 产品特点: 1.完全不使用有毒的,氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。 2.快速,简捷,单个样品RNA提取操作一般可在1小时内完成。 3.试剂盒的独特基因组清除柱和配方确保有效清除基因组DNA残留,一般情况下得到的RNA不需要DNase消化,可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。 4.多次柱漂洗确保RNA高纯度,可直接用于下游各种实验。 注意事项: 1. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。 2. 样品处理量绝对不要过基因组DNA清除柱和RNA吸附柱处理能力,否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大,例如胸腺脾脏DNA含量丰富,过5mg就会过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富,过3x106细胞就会过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时,如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量,如不过2个10μm厚度石蜡切片。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。 3. 裂解液PKD、结合液RBC中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。 4. 预防RNase 污染,应注意以下几方面: 1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase 污染。 2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。 3) RNA提取过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时,塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。 4) 配制溶液应使用无RNase 的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC 至终浓度0.1%( v/v),37℃放置过夜,高压灭菌。) |
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