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产品名称:
超纯血液总RNA提取试剂盒(TRIzol法)
型号:
CS-01F96381
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超纯血液总RNA提取试剂盒(TRIzol法)现货供应,价格实惠。
产品详情

一、概述:

产品属性:

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规格

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超纯血液总RNA提取试剂盒(TRIzol)

Ultra Pure Total RNA Extraction Kit From Blood

20|50

CS-01F96381

本试剂盒本试剂盒适用于快速提取全血高纯度总RNA。采用改进的异硫氰酸胍/酚一步法(TRIzol)裂解细胞和灭活RNA 酶, 然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除, 后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品组分:

组份 20

10X红细胞裂解液RLB 10ml

裂解液RL 25ml

去蛋白液RE 15ml

漂洗液RW 5ml

RNase-free H2O 10ml

70%乙醇 4ml RNase-free H2O

吸附柱 20

收集管(2ml 20

产品特点:

1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2. 结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好,纯度高和离心柱方便快捷的优点,不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程,RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。

3. 独特的RL裂解液配方,可以有效的消除基因组污染。

4. 多次漂洗去蛋白过程,提取RNA纯度更高。

5. 有效的去除了5S在总RNA中含量,提高了纯度。

注意事项:

1. 次使用前请先在漂洗液瓶和70%乙醇瓶中加入量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!

2. 所有离心步骤如未加说明,均在室温进行。使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

3. 裂解液RL和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4. 考虑到环保问题,本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿,用户使用前需要自备氯仿。

5. 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带,分别为~5Kb28S),~2Kb

18S),条带亮度比值约为21。有时候也可以看到~0.1kb0.3Kb(5StRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到45条带也属于正常现象,如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb15Kb之间的不连续的高分子量条带。

6. 检测OD260/OD280吸光度比值时,RNA样品应该溶于TE后检测,如果用水稀释后检测,由于一般水离子度和PH值低,会使OD280升高,从而使比值降低。

7. 加入裂解液RL匀浆后,加氯仿前,样品可在–60-70 保存一个月以上。

8. 关于DNA的微量残留:

一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留, 在大多数RT-PCR 扩增过程中极其微量的DNA 残留(一般电泳EB 染色紫外灯下观察不可见)影响不是很大, 如果要进行严格的mRNA 表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时:

1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA 中的连接区,这样DNA 就不能作为模板参与扩增反应。

2) 选择基因组DNA cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。

3) RNA 提取物用RNase-free DNase I 处理。

4) 在步骤去蛋白液RE 漂洗前,直接在吸附柱 上进行DNase I 消化处理。

储存条件:室温,有效期12个月。(裂解液RL4℃避光保存)

本制品别名:全血RNA提取试剂盒|血液RNA提取试剂盒|全血总RNA提取试剂盒

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

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