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超快血液总RNA提取试剂盒(TRIzol法) | Total RNA Fast Extraction Kit From Blood | 50次 | CS-01F96380 |
本试剂盒本试剂盒适用于快速提取全血(液体样本)高纯度总RNA。采用改进的异硫氰酸胍/酚一步法(TRIzol法)裂解细胞和灭活RNA酶,然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点: 1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 2.结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好,纯度高和离心柱方便快捷的优点,不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程,RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。 3.独特的RLS裂解液配方,可直接裂解全血,不需要先裂解去除红细胞。 4.多次漂洗去蛋白过程,提取RNA纯度更高。 5.有效的去除了5S在总RNA中含量,提高了纯度。 产品组分: 组份 20次 裂解液RLS 25mL 去蛋白液RE 15mL 漂洗液RW 5mL Rase-free H2O 10mL 70%乙醇 4mL RNase-free H2O 吸附柱 20个 收集管(2mL) 20个 注意事项: 1.次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入! 2.所有离心步骤如未加说明,均在室温进行。使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C或者类似离心机。 3.裂解液RLS和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。 4.考虑到环保问题,本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿,用户使用前需要自备氯仿。 5.常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带,分别为~5Kb(28S),~2Kb (18S),条带亮度比值约为2:1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S,tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4,5条带也属于正常现象,如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。 6.检测OD260/OD280吸光度比值时,RNA样品应该溶于TE后检测,如果用水稀释后检测,由于一般水离子度和PH值低,会使OD280升高,从而使比值降低。 7.加入裂解液RLS后,加氯仿前,样品可在–60℃~70℃保存一个月以上。 8.关于DNA的微量残留: 一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留,在大多数RT-PCR扩增过程中极其微量的DNA残留(一般电泳EB染色紫外灯下观察不可见)影响不是很大,如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时: 1)选用跨内含子的引物,以穿过mRNA中的连接区,这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。 2)选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。 3)将RNA提取物用RNase-free的DNase I处理。 4)在步骤去蛋白液RE漂洗前,直接在吸附柱上进行DNase I消化处理。 储存条件:室温,有效期12个月。(裂解液RLS需4℃避光保存) |
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