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产品名称:
RNase抑制剂(小鼠源)
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CS-01F96351
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产品简介
RNase抑制剂(小鼠源)现货供应,价格实惠。
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一、概述:

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RNase抑制剂(小鼠源)

RNase Inhibitor From Mouse(40U/μL)

3000U

CS-01F96351

本品是鼠源重组蛋白,分子量为50kDa,可以特异性抑制RNase ABC活性。它与RNase1:1的比例高效非共价结合从而抑制其活性。但对RNase 1RNase T1S1核酸酶、RNaseH或来源于曲霉属的RNase无效。此外,与下列聚合酶共同使用时,该抑制剂不会抑制聚合酶的活性,如:Taq DNA聚合酶、AMVM-MuLV反转录酶或噬菌体RNA聚合酶(SP6T7T3)

重组小鼠RNase抑制剂不含有半胱,已证实,人源中的半胱能导致抑制剂对氧化敏感甚至失活。因此,小鼠RNase抑制剂与人/RNase抑制剂相比,抗氧化能力显著提高,且在DTT浓度较低(<1mM)时更稳定。这使其在不适宜高浓度DTT的反应中更具优势,如实时RT-PCR

产品特点:

1.抑制常见真核RNase

2.Taq聚合酶、AMVM-MuLV反转录酶兼容;

3.在较宽的pH范围内均有活性(pH58)

4.cDNA合成和RT-PCR

5.体外转录/翻译;

6.酶催化的RNA标记反应。

活性定义:1单位指抑制5ng RNase A 50%活性所需要的小鼠RNase抑制剂的量。活性测定是通过抑制RNase A对胞2,3-环单磷酸盐的水解来进行。

实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀  
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟,离心前看不出RNA沉淀,离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签:RNase抑制剂(小鼠源) 3000U 

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