实验前准备及重要注意事项：

1、预防RNase污染，应注意以下几方面：

① 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。

② 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。

③ 配制溶液应使用无RNase的水。

④ 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。

2、提取的样品避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。

3、本品中含有，具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品，如装、手套、眼罩、面罩等。如果不小心接触到眼睛，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。

4、样品用游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂匀浆后，如不即刻加入氯仿，置于-70℃可放置一个月以上。

5、保存在75%乙醇中的RNA沉淀，2～8℃可以保存一周，-20℃条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短，容易降解，建议提取后尽快进行后续实验，如反转录成cDNA，Northern Blot等。

6、若下游实验对DNA非常敏感，建议用不含RNase的DNase I对RNA进行处理。

操作步骤：

1、取200μl新鲜或者冻存的血清或血浆，加入3倍体积的游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂。振荡30秒，充分混匀。

注意：样本加入游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂后，可能会出现沉淀，经过振荡混匀后，沉淀基本消失。若仍有少量沉淀，不影响下游实验，可继续操作。

2、将处理后的样品在室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。

3、向以上溶液中加入氯仿，每使用1ml血清/血浆样本专用总RNA提取试剂加入0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置2-3分钟。

注意：如不能涡旋混匀，可手动快速颠倒混匀2分钟。

4、4℃ 12000rpm离心20分钟，此时样品分成三层：红色有机相，中间层和上层无色水相，RNA 主要在水相中，把水相转移到一个新的无RNase的离心管(自备)中。

5、在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇，颠倒混匀，室温放置30分钟。或-20℃沉淀过夜，效果更佳。

6、4℃ 12000rpm 离心20分钟，弃上清。

注意：离心前RNA沉淀经常是看不见的，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。

7、加入75%乙醇(用无RNase的水配制)洗涤沉淀。每使用1ml游离RNA(血清血浆尿液)提取试剂加入1ml 75%乙醇对沉淀进行洗涤。

8、4℃ 12000rpm离心3分钟，小心吸弃上清，注意不要吸弃RNA沉淀。

注意：剩余的少量液体可短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸弃沉淀。

9、室温放置2-3分钟，晾干。加入30-100μl无RNase的水，充分溶解RNA，得到的RNA保存在-70℃，防止降解。

注意：沉淀不要过分干燥，以免难于溶解。

储存条件：2～8℃。