病毒沉淀剂CS-01F96321_上海莼试生物技术有限公司

产品详情

一、概述：

产品属性：

产品名称	英文名称	规格	货号
病毒沉淀剂	Virus Precipitation Reagent	100mL	CS-01F96321

生物医学实验中，常常需要从液体样品(如血浆，培养基)中纯化病毒，但由于病毒颗粒十分细小，传统的分离方法是使用长时间超速离心才能将其从液体样品中分离出来，此操作非常繁琐，并且病毒在此过程中容易变性。为了克服传统方法的缺点，本公司开发了本产品。

产品特点

能浓缩病毒100倍以上，适合各种病毒。

比超速离心法、密度梯度离心分离法和过滤法更温和，回收率更高，并且大部分病毒能保持活性，适合各种后续实验，包括转染实验和核酸纯化。

比超速离心法和密度梯度离心分离法简单，不需要大型离心机等设备。

适合水样、细胞培养基上清和其他不含细胞的样品。本产品100mL可以处理400mL含病毒的溶液，可以将病毒浓缩100倍以上。

已经成功用于coronaviruses、rhabdoviruses、parainfluenzaviruses、respiratory syncytial virus、rubella virus、picornaviruses等病毒。

对环境水样，请不要使用本产品，而是使用水体病毒沉淀剂。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂

PBS缓冲液或TES缓冲液(用于重悬病毒)

使用方法

注意：需要尽量减少含病毒溶液中蛋白的浓度。收集培养细胞分泌的病毒前，最好换上不含血清蛋白和其他蛋白成分的培养基。

将培养细胞刮下，和培养基一起全部转移到干净的离心管中，10000rpm 4℃离心20分钟。转移上清(含病毒)到新离心管中。如果培养细胞内还有病毒颗粒，并且病毒颗粒可以抵抗冻融，则可以把细胞冻融数次，释放出包浆的病毒，然后再转移到干净的离心管中，10000rpm 4℃离心20分钟。转移上清(含病毒)到新离心管中。如果病毒溶液不含细胞成分，则直接进入下一步。

在含病毒的上清中加入1/4总体积的本产品(4mL病毒溶液则加1mL本产品)，4℃冰箱中放置过夜或12小时以上。病毒在此期间将形成沉淀。

10000rpm 4℃离心20分钟收集病毒沉淀，尽可能弃掉所有上清(可以暂时保留上清，等确认病毒浓缩成功后再丢弃)。

将离心管放回离心机短暂离心数秒，再次小心去除残留上清。

将沉淀(病毒颗粒)溶于适量预冷的自备的缓冲液(如PBS缓冲液、TES缓冲液和培养基中，取决于后续实验)，立即使用或者-20℃长期保存。

实验步骤：

(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀

(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次

(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::异戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等体积的:异戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)

(7)10,000rpm,4℃离心20min

(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::异戊醇(25:24:1)抽提两次,:异戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃离心20 min

(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC处理水溶解

(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量

(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)

操作步骤:

1. 匀浆处理:a.组织将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。

b.单层培养细胞直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。

c．细胞悬液离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。

2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。

3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。

5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。

6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。

8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。

标签：病毒沉淀剂 100mL

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