公司上万种科研产品,主要供应各大科研单位和学校,是国内众多科研单位的供应商。公司严把质量关,确保每一个出厂产品质量合格,让您买的省心,用得放心。
产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
细胞壁不溶性酸性转化酶(cell-wall binding acid invertase, B-AI)试剂盒 | 微量法 | 100管/48样 | CS-01S63837 |
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
蔗糖转化酶(Invertase,Ivr)催化蔗糖不可逆地分解为果糖和葡萄糖,是高等植物蔗糖代谢关键酶之一。根据最适 pH,Ivr分为酸性转化酶(AI)和中性转化酶(NI)两种类型。
AI的最适pH为3~5。AI分为可溶性AI(S-AI)和细胞壁不溶性AI(B-AI)两种类型。B-AI存在于细胞间隙并结合在细胞壁上,主要参与韧皮部质外体卸载时蔗糖的分解,以维持库源之间蔗糖的浓度。
测定原理:
B-AI催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范围内510nm光吸收增加速率与B-AI活性成正比。
自备用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液1:液体100mL×1瓶,4℃保存;
提取液2:液体100mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入10mL试剂一充分溶解备用;用不完的试剂4℃保存;
试剂三:液体15mL×1瓶,4℃保存;
粗酶液提取:
按照组织质量(g):提取液1体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液1),进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心10min,弃上清,沉淀中加入1mL蒸馏水,充分震荡混匀,12000g 4℃离心10min,弃上清,沉淀中加入1mL提取液2 充分混匀,4℃浸提过夜,12000g 4℃离心20min,取上清置冰上待测。
测定步骤和加样表:
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至510nm,蒸馏水调零。
2、样本测定,(在EP管中依次加入下列试剂):
B-AI活性计算:
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0016x -0.001;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。
(1)按蛋白浓度计算:
单位的定义:37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI活性(μg /min/mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷Cpr
(2)按鲜重计算:
单位的定义:37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI活性(μg /min /g鲜重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2) ÷T=20.8×(ΔA +0.001) ÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
b.用96孔板测定的计算公式如下
标准条件下测定的回归方程为y = 0.0008x -0.001;x为标准品浓度(μg/mL),y为吸光值。
(1)按蛋白浓度计算:
单位的定义:37℃每mg蛋白每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI活性(μg /min /mg prot)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(V1×Cpr ) ÷T=41.6×(ΔA +0.001) ÷Cpr
(2)按鲜重计算:
单位的定义:37℃每g组织每分钟产生1μg还原糖定义为一个酶活性单位。
B-AI活性(μg /min /g鲜重)=[(ΔA +0.001) ÷0.0008×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T =41.6×(ΔA +0.001) ÷W
V1:加入反应体系中样本体积,0.05mL;V2:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,30min; Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g。
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
联系人:高小姐
手 机:13585831301
Q Q:3004967995
座 机:021-59541103
传 真:021-60443211
地 址:上海嘉定区嘉罗公路1661