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产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
蔗糖合成酶(合成方向;SS-Ⅱ)试剂盒 | 微量法 | 100管/48样 | CS-01S63830 |
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
蔗糖是源(叶片等)光合产物向“库”器官运输的主要形态。蔗糖合成酶(Sucrose Synthase, EC
测定原理
SS-Ⅱ催化游离果糖与葡萄糖供体UDPG反应生成蔗糖,蔗糖与间苯二酚反应可呈现颜色变化,在480nm下有特征吸收峰,酶活力大小与颜色的深浅成正比。
需自备的仪器和用品
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机、移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰
试剂的组成和配制
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体2.5mL×1瓶,-20℃保存;
试剂二:1000μg/mL蔗糖溶液10mL×1瓶,4℃保存;
试剂三:液体2mL×1瓶,4℃保存
试剂四:液体25mL×1瓶,4℃保存;
试剂五:液体6mL×1瓶,4℃避光保存;
样品测定的准备:
按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上,调节波长至480nm,蒸馏水调零。
2、样本测定,(在EP管中依次加入下列试剂):
SS-Ⅱ活性计算
1、按照蛋白浓度计算
单位定义:每mg组织蛋白每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅱ活性(μg /min/mg prot)= C标准管×V1×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(V1×Cpr)÷T=100×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷Cpr
2、按照样本鲜重计算
单位定义:每g组织每分钟催化产生1μg 蔗糖定义为一个酶活力单位。
SS-Ⅱ活性(μg /min/g鲜重) = C标准管×V1×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷(W×V1÷V2)÷T=100×(A测定管-A对照管)÷(A标准管-A空白管)÷W
C标准管:标准管浓度,1000μg/mL;V1:加入反应体系中样本体积,0.01mL; V2:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;T :反应时间:10min。
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
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