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产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
花青素还原酶(anthocyanidin reductase,ANR)试剂盒 | 微量法 | 100T/96S | CS-01S63824 |
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
花青素还原酶是黄酮合成途径中的关键酶,在植物体内起非常重要的调控作用,对花青素还原酶的调控机制研究有利于从基因水平改变植物的品质。
测定原理
花青素还原酶在NADPH存在的条件下作用于飞燕草色素转变为表没食子儿茶素和NADP,使反应体系在340nm处的吸光值下降,吸光值下降速率反应了花青素还原酶的活性。
需自备的仪器和用品
天平、研钵、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
试剂四:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加1mL蒸馏水溶解;用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。
酶液提取
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g ,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2.培养液等液体:直接检测。
测定操作表
酶活性计算公式
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在40℃,pH6.5条件下,每毫克蛋白每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/mg prot)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T
= 80.39×ΔA÷Cpr
(2)按照样本质量计算
酶活性定义:在40℃,pH6.5条件下,每克组织每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/g 鲜重)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T
= 80.39×ΔA÷W
(3)按液体体积计算
酶活性定义:在40℃,pH6.5条件下,每毫升液体每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/mL)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T
= 80.39×ΔA
V反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,20min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
b.用96孔板测定的计算公式如下
(1)按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在40℃,pH6.5条件下,每毫克蛋白每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/mg prot)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr) ÷T
= 160.78×ΔA÷Cpr
(2)按照样本质量计算
酶活性定义:在40℃,pH6.5条件下,每克组织每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/g 鲜重)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T
= 160.78×ΔA÷W
(3)按液体体积计算
酶活性定义:在40℃,pH6.5条件下,每毫升液体每分钟催化1nmolNADPH定义为一个酶活力单位。
ANR活性(nmol/min/mL)= ΔA÷(ε×d)×V反总÷V样÷T
= 160.78×ΔA
V反总:反应体系总体积,0.2mL;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,0.5cm;V样:加入样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;T:反应时间,20min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
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