测定原理：

氢受体2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑（2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride，TTC）在细胞呼吸过程中接受氢以后，被还原为三苯基甲鐟（Triphenyl Formazone, TF），在波长485nm处有最大吸收峰，采用分光光度法于485nm测定其吸光值，即得土壤脱氢酶活性。

自备实验仪器及用品：

筛子、天平、恒温培养箱或水浴锅、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、冰、蒸馏水、甲醇（不允许快递，请用户自备）。

试剂的组成和配制：

试剂一：粉剂×1瓶，使用前加10mL试剂二溶解，4℃避光保存（尽量现配现用）。

试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：甲醇，自备。

样品处理：

胞外酶：取1mL样本，8000g 25℃离心10min，取上清液测定。

胞内酶: 取1mL样本，8000g 25℃离心10min，弃上清，在沉淀中加入1mL蒸馏水，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），8000g 25℃离心10min，取上清液测定。

测定步骤和操作表：

脱氢酶活力计算：

标准曲线：y = 0.0211x - 0.0312；R2 = 0.9988；x为标准品浓度（μg/mL），y为吸光值。

（1）按样本体积计算

酶活单位定义：在37℃时，每mL样品每天催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

sDHA（μg/ d /mL）=（△A+0.0312）÷ 0.0211×V反总÷V样÷T= 995.26×（△A+0.0312）

（2）按样本蛋白浓度计算

酶活单位定义：在37℃时，每mg蛋白样品每天催化产生1μgTF为一个酶活性单位。

sDHA（μg/ d / mg prot）=（△A+0.0312）÷ 0.0211×V反总÷V样÷T÷Cpr = 995.26×（△A+0.0312）÷Cpr

V反总：反应总体积，1.05mL；T：培养时间，1d；V样：样本体积，0.05mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。

注意事项：

配制好的试剂一避光保存于4℃，最好在一周内使用，若出现红色，则不能使用。