土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源之一。S-NPT在中性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

测定原理：

中性条件下，S-NPT可将酪蛋白水解产生酪氨酸；在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝；在680nm有特征吸收峰。

实验中所需仪器及设备：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔板、双蒸水

试剂组成和配置：

试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5ml蒸馏水充分溶解；用不完的试剂4℃保存；

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入50μL试剂七使粉剂润湿，然后加入10ml试剂一，转入烧杯中沸水浴磁力搅拌溶解后待用；用不完的试剂4℃保存；（可在烧杯上盖一层保鲜膜，注意观察，避免水分全部蒸发，一般加热15-30分钟，该试剂为过饱和试剂，充分混匀后仍出现颗粒物不溶物不影响使用）。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入20ml蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存；

试剂五：液体3mL×1瓶，4℃保存；

试剂六：液体1.5mL×1支，50μg/ml标准酪氨酸溶液，4℃保存；

试剂七：液体1.5mL×1支，4℃保存；

样品处理：

胞外酶：取1mL样本，8000g 25℃离心10min，取上清液测定。

胞内酶: 取1mL样本，8000g 25℃离心10min，弃上清，在沉淀中加入1mL蒸馏水，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3秒，间隔10秒，重复30次），8000g 25℃离心10min，取上清液测定。

测定操作：

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。

2、试剂二、三和四40℃水浴10min。

3、样本测定：

S-NPT活性计算：

（1）按样本体积计算

单位定义：每min每mL样本产生1μg酪氨酸为一个 S-NPT活力单位。

S-NPT(μg/min/mL)=C标准×(A测定管-A对照管)÷A标准管×V反总÷V样÷T=35×(A测定管-A对照管)÷A标准管

（2）按样本蛋白浓度计算

单位定义：每min每mg组织蛋白产生1μg酪氨酸为一个 S-NPT活力单位。

S-NPT(μg/min/mg prot)=C标准×(A测定管-A对照管)÷A标准管×V反总÷V样÷T÷Cpr =35×(A测定管-A对照管)÷A标准管÷Cpr

C标准管：标准管浓度， 50μg/mL；V反总：反应体系总体积，0.21mL；T：反应时间，30min； V样：样本体积，0.01mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。