上海莼试生物技术有限公司
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公司上万种科研产品，主要供应各大科研单位和学校，是国内众多科研单位的供应商。公司严把质量关，确保每一个出厂产品质量合格，让您买的省心，用得放心。
| 产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
| 海藻糖酶（Trehalase，THL）试剂盒 | 微量法 | 100管/48样 | CS-01Ｓ63759 |
注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
THL（EC
测定原理：
THL催化海藻糖产生葡萄糖，葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在505 nm有特征吸收峰，以此反映THL活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体6mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体 10ml×1瓶，4℃保存；
试剂三：液体 10ml×1瓶，4℃保存；（若出现结冰现象，可37℃水浴溶解后使用）
样品测定的准备：
1、细菌或细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3S，间隔10S，重复30次）；8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织的处理：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），冰浴中匀浆。8000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）的处理：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议取0.1mL血清（浆）加入1mL提取液），冰浴中匀浆。8000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤
1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。
2、调节水浴锅至95度。
3、工作液的配制：使用前将试剂二和试剂三1:1等体积混合，用多少配多少。
4、加样表：
THL活力计算：
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y = 0.4858x - 0.0042，R2 = 0.9999；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值。
2、按照蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
THL活力(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V反总÷(V样×Cpr)÷T×1000
=366× (ΔA+0.0042) ÷Cpr
3、按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
THL活力(nmol/min/g 鲜重)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T×1000
=366×(ΔA+0.0042)÷W
4、按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
THL活力(nmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V反总÷(500 ×V样÷V样总) ÷T×1000
=0.732×(ΔA+0.0042)
5、按血清（浆）体积计算
单位的定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1nmol 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
THL活力(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0042) ÷0.4858×V反总÷(V液 ×V样÷V样总) ÷T×1000
=3660×(ΔA+0.0042)
V样：加入样本体积：0.03mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；V反总：反应体系总体积，0.08mL；V液：加入血清（浆）体积，0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万；T：反应时间，15min；
b.用96孔板测定的计算公式如下
1、标准条件下测定回归方程为y = 0.2429x - 0.0042，R2 = 0.9999；x为标准品浓度（μmol/mL），y为吸光值。
2、按照蛋白浓度计算
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
THL活力(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0042) ÷0.2429×V反总÷(V样×Cpr)÷T×1000
=732× (ΔA+0.0042) ÷Cpr
3、按样本鲜重计算
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
THL活力(nmol/min/g 鲜重)=(ΔA+0.0042) ÷0.2429×V反总÷(W ×V样÷V样总) ÷T×1000
=732×(ΔA+0.0042)÷W
4、按细菌或细胞密度计算
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
THL活力(nmol/min/104 cell)=(ΔA+0.0042) ÷0.2429×V反总÷(500 ×V样÷V样总) ÷T×1000
=1.464×(ΔA+0.0042)
5、按血清（浆）体积计算
单位的定义：每mL血清（浆）每分钟催化产生1nmol 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
THL活力(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0042) ÷0.2429×V反总÷(V液 ×V样÷V样总) ÷T×1000
=7320×(ΔA+0.0042)
V样：加入样本体积：0.03mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；V反总：反应体系总体积，0.08mL；V液：加入血清（浆）体积，0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500万；T：反应时间，15min；
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗，食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
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