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生化检测试剂盒 > 微量检测试剂盒 > 氨基酸(amino acid, AA)含量测定试剂盒微量法100T/96S
产品名称:
氨基酸(amino acid, AA)含量测定试剂盒微量法100T/96S
型号:
CS-01S63573
生产地址
进口、国产
产品价格
电议
产品简介
半胱氨酸(cysteine, Cys)含量测定试剂盒质量可靠、价格优惠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点。
产品详情

一、概述:

 公司上万种科研产品,主要供应各大科研单位和学校,是国内众多科研单位的供应商。公司严把质量关,确保每一个出厂产品质量合格,让您买的省心,用得放心。

产品名称

检测方法

规格

货号

氨基酸(amino acid, AA)含量测定试剂盒

微量法

100T/96S

CS-0163573

 注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:

氨基酸(amino acid, AA)含量测定试剂盒质量可靠、价格优惠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点。

商品介绍:

测定原理:

氨基酸的α -氨基可与水合茚三酮反应,产生蓝紫色化合物,在570 nm有特征吸收峰;通过测定570 nm吸光度,来计算氨基酸含量。

自备仪器及用品:

台式离心机、水浴锅、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵、无水乙醇、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:液体×1瓶,4℃保存。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1瓶(棕色),4℃避光保存。临用前加入667μL无水乙醇,盖紧后充分混匀,再加入9.333 mL蒸馏水混匀,避光保存。

试剂四:粉剂×1管,4℃避光保存。临用前加1 mL蒸馏水,充分溶解。

标准品:粉剂×1瓶,临用前加10 mL蒸馏水,充分溶解。1μmol/mL标准液,4℃避光保存。

样品中AA提取:

1.按照组织质量(g):试剂一体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行室温匀浆,然后转移到1.5 mL EP 管中,盖紧后(防止水分散失)置于沸水浴提取15 min;自来水冷却后,8000g,,4℃离心10min,上清液置冰上待测。

2.细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次);8000g4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

3.血清等液体:直接检测。

测定操作:

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min,调节波长到570 nm,蒸馏水调零。

2. 空白管:取EP管,加入10μL蒸馏水,100μL试剂二,100μL试剂三和10μL试剂四,混匀后盖紧瓶盖(防止水分散失),置于沸水浴中保温15 min,冷却后反复颠倒EP管数次,于570nm测定吸光值,记为A空白管。显色后务必在30min内测完。

3. 标准管:取EP管,加入10μL标准品,100μL试剂二,100μL试剂三和10μL试剂四,混匀后盖紧瓶盖(防止水分散失),置于沸水浴中保温15 min,冷却后反复颠倒EP管数次,于570nm测定吸光值,记为A标准管。显色后务必在30min内测完。

4. 测定管:取EP管,加入10μL上清液,100μL试剂二,100μL试剂三和10μL试剂四,混匀后盖紧瓶盖(防止水分散失),置于沸水浴中保温15 min,冷却后反复颠倒EP管数次,于570nm测定吸光值,记为A测定管。显色后务必在30min内测完。

注意:空白管和标准管只需要测定一次。

氨基酸含量计算公式:

a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1)按蛋白浓度计算

氨基酸含量(μmol /mg prot= [C标准品×V标准品×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)]÷(V样×Cpr

=1×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷Cpr

2)按样本质量计算

氨基酸含量(μmol /g 鲜重)=[C标准品×V标准品×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)] ÷(V样总÷V样)÷W

=1×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷W

3)按细胞数量计算

氨基酸含量(μmol /104 cell=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)] ×(V样总÷V样×细胞数量)

=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷细胞数量

4)按照液体体积计算

氨基酸含量(μmol /mL=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]÷V

=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)

C标准品:标准品浓度,1 μmol/mLV标准品:反应体系中加入标准品体积,0.01 mLW:样品质量,gV样:反应体系中加入样品提取液体积,0.01 mLV样总:样品提取液总体积,1mL;;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL

b.使用96孔板测定的计算公式如下

1)按蛋白浓度计算

氨基酸含量(μmol /mg prot=[C标准品×V标准品×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)] ÷(V样×Cpr

=1×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷Cpr

2)按样本质量计算

氨基酸含量(μmol /g 鲜重)=[C标准品×V标准品×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白)]×(V样总÷V样)÷W

=1×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷W

3)按细胞数量计算

氨基酸含量(μmol /104 cell= [C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)] ×(V样总÷V样×细胞数量)

=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷细胞数量

4)按照液体体积计算

氨基酸含量(μmol /mL=[C标准品×V标准品×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)]÷V

=1×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)

C标准品:标准品浓度,1 μmol/mLV标准品:反应体系中加入标准品体积,0.01 mLW:样品质量,gV样:反应体系中加入样品提取液体积,0.01mLV样总:样品提取液总体积,1mLCpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL

注意事项:

1. 试剂盒中试剂三、试剂四和标准品均需临用前配制,且避光保存,配制好未使用完的4℃保存且3天内使用完毕。

2. 为保证实验结果的准确性,需先取1-2个样做预实验,如果测定的吸光值过高(高于2.5),用蒸馏水稀释后再测定。

3. 脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应在570nm处无吸收峰,因此,570nm处测定结果不含这两种氨基酸的量。

4.最低检出限为100μmol/L

注意:

1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

标签:氨基酸(amino acid  AA)含量测定试剂盒 

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