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生化检测试剂盒 > 分光检测试剂盒 > NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)试剂盒分光光度法50管/48样
产品名称:
NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)试剂盒分光光度法50管/48样
型号:
CS-01S63212
生产地址
进口、国产
产品价格
电议
产品简介
NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)试剂盒质量可靠、价格优惠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点。
产品详情

一、概述:

 公司上万种科研产品,主要供应各大科研单位和学校,是国内众多科研单位的供应商。公司严把质量关,确保每一个出厂产品质量合格,让您买的省心,用得放心。

产品名称

检测方法

规格

货号

NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)试剂盒

分光光度法

50/48

CS-0163212

  
注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义:

细胞色素P450酶是一组主要存在于肝脏的同工酶,在外源物质代谢中具有重要作用,尤其是药物和毒物的代谢。NCR作为P450酶系的重要一员,催化氧化型P450还原再生。

商品介绍:

测定原理:

NCR催化NADPH还原氧化型细胞色素c生成还原型细胞色素c,还原型细胞色素c550nm处有特征吸收峰;通过测定550nm吸光度的增加速率,来计算NCR活性。

自备仪器和用品:

可见分光光度计、普通离心机,超速离心机、可调式移液枪、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制:

试剂一:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加100mL蒸馏水充分溶解。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。

试剂三:粉剂×1瓶,-20℃保存。临用前配制,加2.6 mL蒸馏水充分溶解,4℃保存。

试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前配制,加550 μL蒸馏水充分溶解,4℃保存。

粗酶液提取:

1、除去细胞核和线粒体等:称约0.5g组织,加入4℃预冷的1 mL试剂一,冰上充分研磨,10 000g 4℃离心30min,取上清液,转移到超速离心管中。

2、粗制微粒体:4℃,100 000g,离心60min,弃上清液。

3、除血红蛋白等杂质:向步骤2的沉淀中加1 mL试剂一,盖紧后充分震荡溶解,100 000g离心30min,弃上清液。

4、最终微粒体:向步骤3的沉淀中加试剂二0.5 mL,盖紧后充分震荡溶解,4℃保存待测。

测定操作:

1. 分光光度计预热30 min,调节波长到550 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂二在37℃水浴中预热30min

3. 空白管:取1mL玻璃比色皿,依次加入50μL蒸馏水、900μL试剂二、50μL试剂三和10μL试剂四,迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化,第10 s和第130 s吸光值分别记为A1A2,△A空白管=A2-A1

4. 测定管:取1mL玻璃比色皿,依次加入50μL粗酶液、900μL试剂二、50μL试剂三和10μL试剂四,迅速混匀后于550nm处测定2min内吸光值变化,第10 s和第130 s吸光值分别记为A3A4,△A测定管=A4-A3

注意:空白管只需要做一次。

计算公式:

(1).按照蛋白浓度计算

活性单位定义:37℃中,每毫克蛋白每分钟催化产生1nmol还原型细胞色素C1个酶活单位。

NCR酶活性 (nmol/min/mg prot)= (A测定管-A空白管)÷ε÷d×V反总÷(Cpr×V样)÷T

= 529×(A测定管-A空白管)÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:37℃中,每克样品每分钟催化产生1nmol还原型细胞色素C1个酶活单位。

NCR酶活性(nmol/min/g 鲜重)= (A测定管-A空白管)÷ε÷d×V反总÷(W×V样÷V样总)÷ T

= 265×(A测定管-A空白管)÷W

ε:还原型细胞色素C摩尔消光系数,19100L/mol/cm=0.0191L/μmol/cmd:比色皿光径,1cmV反总:反应体系总体积,1010μL=0.00101LCpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL,需要另外测定;V样:加入反应体系中上清液体积,50μL=0.05mLV样总:加入提取液体积,0.5mLW:样本质量,gT:反应时间,2min

注意事项:

试剂三、试剂四临用前配制,配好未使用完的4℃可保存两天。

注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

标签:NADPH-细胞色素C还原酶(NCR)试剂盒 

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