测定原理

CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP与葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶催化6-磷酸葡萄糖与NADP+生成NADPH，导致340nm光吸收值增加。

自备实验用品及仪器

天平、低温离心机、恒温水浴锅、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿和蒸馏水。

试剂组成和配制

提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂1瓶，4℃避光保存，使用前加15mL蒸馏水溶解。

试剂二：液体15mL×1瓶，4℃保存。

工作液：临用前根据用量将试剂一和试剂二以1:1混合。使用前37℃温育2min。

粗酶液提取

1.组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后10000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。

2.血清样本：直接测定。

测定操作表

1. 紫外分光光度计预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2．在1 mL石英比色皿中加入200μL样本和300μL蒸馏水，最后加入500μL工作液，立即混匀，37℃下测定初始吸光值A1与1min后的吸光值A2，ΔA＝A2-A1。

CK活性计算公式

1、按组织蛋白含量计算

酶活定义：37℃，pH7.0时，每毫克蛋白质1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。

CK活性（nmol/min / mg prot）=×V反总÷(V样×Cpr)= 804×△A÷Cpr

2、按组织样本质量计算：

酶活定义：37℃，pH7.0时，每克样品1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。

CK活性（nmol/min /g 鲜重）=×V反总÷(V样÷V样总×W)= 804×△A÷W

3. 按血清计算：

酶活定义：37℃，pH7.0时，每升血清1min内催化产生1nmol NADPH为一个酶活单位。

CK活性（nmol/min /L）=×V反总÷V样= 804×△A

：NADPH摩尔消光系数，6220 L /mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，1mL；V样：反应体系中样本体积，0.2mL；T，反应时间，1min；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g

注意事项

1. 配制好的工作液4℃稳定7天，请配制后尽快使用。

2. 血清的CK不稳定，采集样本后尽快测定，4℃避光保存可稳定24h。

3. 样品蛋白质含量需要另外测定，可选用BCA蛋白含量测定试剂盒进行测定。

4. OD值大于0.5可用提取液适当稀释样品，并在计算公式中相应的改变稀释倍数。