土壤总磷包括有机磷和无机磷，其中无机磷能够直接被植物利用。土壤有机磷经过矿化分解而转化为无机磷。同时测定土壤总磷、有机磷和无机磷，可以全面反映土壤磷营养状况。

测定原理：

利用钼蓝法定磷。取一份土样，通过浸提法测定土壤无机磷含量；另外取一份土样，经高温灼烧后，土壤有机磷转化为无机磷，测得土壤总磷含量；总磷含量减去无机磷含量，即可计算出有机磷含量。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式水浴锅，分析天平、可调式移液器、550℃高温电炉，1mL玻璃比色皿、蒸馏水、100目筛子（可更小）。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×1瓶，4℃保存。临用前用蒸馏水稀释10倍后再用。

试剂二：液体×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入20 mL蒸馏水，充分溶解后加入10 mL试剂二，混匀。

标准品：液体×1支，20 μ mol/L无机磷标准品，4℃保存。

土壤不同形态磷提取：

1. 无机磷：称取通过100目筛子的风干土样0.1g，转移到10 mL离心管，加入10mL试剂一，震荡混匀，然后置于45℃水浴1h，8000g，25℃离心10min，取上清液一，用于无机磷含量测定。

2. 总磷提取：取通过100目筛子的风干土样，550℃灼烧1h，冷却后称取约0.1g，转移到10 mL离心管，加入10mL试剂一，震荡混匀，然后置于45℃水浴1h，8000g，25℃，离心10min，取上清液二，用于总磷含量测定。

测定步骤：

1. 分光光度计预热30 min，调节波长到660 nm，蒸馏水调零。

2. 打开水浴锅，调节温度到40℃。

3. 空白管：取EP管，依次加入500μL蒸馏水，500μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度，记为A空白管。

4. 标准管：取EP管，依次加入50μL标准液，450μL蒸馏水，500μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度，记为A标准管。

5. 测定管：取EP管，依次加入50μL上清液一或者上清液二，450μL蒸馏水，500μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度，记为A测定管。

注意：空白管和标准管只需测定一次。

土壤磷含量计算：

1.土壤无机磷含量（μmol /g）=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V 总÷W =0.2×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷W

C标准液：20 μmol/L； W：土壤样品质量，g； V总：上清液一总体积，10 mL=0.01 L。

2.土壤总磷含量（μmol /g干重）=[C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V总÷W=0.2×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷W

C标准液：20 μmol/L；V标准液：50μL=0.05 mL；W：土壤样品质量，g；V总：上清液二总体积，10 mL=0.01 L。

3. 土壤有机磷（μmol /g）=土壤总磷-土壤无机磷

注意事项：

试剂三配制过程中，可能会产生黑色固体，其不影响结果，注意吸取时不要将黑色固体吸入。