复合体Ⅱ又称琥珀酸-辅酶Q还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同时辅基FAD还原为FADH2，后者进一步还原氧化型辅酶Q生成还原型辅酶Q，是呼吸电子传递链的支路。

测定原理

复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶Q可进一步还原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰，通过检测2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算该酶活性。

需自备的仪器和用品

可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制

试剂一：50mL×1瓶，-20℃保存；

试剂二：液体25mL×1瓶，4℃保存；

试剂三：粉剂×1支，-20℃保存；

试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；

试剂五：液体2.5mL×1瓶，4℃保存；

叶绿体的提取：

1、称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一，用冰浴匀浆器或研钵匀浆，很快研磨或捣碎，30秒内完成，使之成为匀浆液。

2、将匀浆液于200g（离心率），4℃离心1min。

3、弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，1500g，4℃离心5min。

弃上清液，于沉淀中加入0.5mL试剂一混匀配成叶绿体悬浮液。混匀后测定叶绿体酶活性测定步骤：

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至605nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

（1）工作液的配制：临用前把试剂三和试剂四转移到试剂二中混合溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）孵育5min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

（2）在1mL玻璃比色皿中加入40μL样本、100μL试剂五和800μL工作液，立即混匀，记录605nm处初始吸光值A1和 2min后的吸光值A2，计算ΔA=A1-A2。

复合体Ⅱ活力单位的计算

（1） 按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。

复合体Ⅱ活力(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=559×ΔA÷Cpr

此法需要自行测定样本蛋白质浓度。

（2） 按样本鲜重计算

单位的定义：每g组织每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。

复合体Ⅱ活力(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(W× V样÷V样总) ÷T=280×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算

单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。

复合体Ⅱ活力(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V反总÷（ε×d）×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T =0.560×ΔA

V反总：反应体系总体积，9.4×10-4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×104 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.04 mL；V样总：加入提取液体积，0.5 mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万。