土壤汞污染能够通过食物链传递和富集，对植物、动物和人类健康产生威胁。矿山开发、工业加工、农业生产和生活垃圾常常造成土壤汞污染，因此评价和防止土壤重金属污染常常需要测定土壤汞含量。

测定原理：

土壤经消化后，汞以Hg2+离子形式存在；Hg2+能与二硫腙生成橙色络合物，溶于三氯甲烷后，在490nm测定吸光度，即可计算S-Hg含量。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅、可调式移液枪、100目筛（可更小）、浓硫酸、浓盐酸、浓硝酸、三氯甲烷和蒸馏水。

试剂组成和配制：

标准品：液体×1支，4 n mol/mL Hg标准液，4℃保存。

试剂一：自备。提供50 mL空试剂瓶。在该试剂瓶中加入26 mL蒸馏水，18 mL浓盐酸，6 mL浓硝酸，混匀，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加46 mL蒸馏水充分溶解。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加5.5 mL蒸馏水充分溶解。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加2.6 mL蒸馏水充分溶解。

试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加13 mL蒸馏水充分溶解。

试剂六：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加50 mL三氯甲烷充分溶解。

S-Hg测定操作：

1.分光光度计预热30 min，调节波长到490 nm，三氯甲烷调零。

2.样品管：风干的土壤，过100目筛后精确称取0.1 g左右，装入EP管；加入1 mL试剂一，充分混匀后沸水浴消化60 min。取出冷却后室温8000g离心10min，吸取100 μ L上清液加入新的EP管（≥2.5 mL）；再先后加入900 μ L蒸馏水和100 μ L浓硫酸，混匀；最后加入9 00 μ L试剂二，混匀后40℃水浴24h，期间震荡数次。

3.标准管：取EP管，加入100 μ L标准液，900 μ L蒸馏水和100 μ L浓硫酸，混匀；最后加入900 μ L试剂二，混匀后40℃水浴24h，期间震荡数次。

4.于样品管和标准管分别加入100 μ L试剂三，震荡至无色；开盖静置30min，期间摇荡数次，以排出气体。

5. 加入50 μ L试剂四，充分混匀后静置5min；加入250μL试剂五，盖紧后震荡至少1min，静置10min以分层。

6.心吸取100 μ L下层溶液，加入1mL试剂六，震荡使无色，静置10 min以分层。

7.小心吸取700 μ L下层溶液，加入1mL玻璃比色皿，于490nm处比色，记录各管吸光值。分别记为A样品管和A标准管。

注意：标准管只需测定一次。

S-Hg浓度计算公式：

S-Hg（n mol Hg/g）= [C标×A测定管÷A标准管]×V总÷V样÷W

= 40×A测定管÷A标准管÷W

C标：标准液浓度，4 n mol/mL Hg；V总：上清液总体积，1 mL；W：土样质量，g；V样：加入上清液体积，100 μ L=0.1 mL。

注意事项：

1、试剂一有刺激性气味，易挥发，实验过程中应注意佩戴口罩和手套，使用完立即盖好盖子，以免试剂不够；

2、测定过程中需加入浓硫酸，加浓硫酸时需注意，避免溅到皮肤或眼睛上；

3、静置分层后，用1mL移液枪，排除空气后，轻轻插入下层溶液中，缓慢吸取下层溶液。