产品名称 | 检测方法 | 规格 | 货号 |
考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒 | 分光光度法 | 50管/48样 | CS-01S63360 |
样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外,可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
测定原理:
在酸性溶液中,考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合形成蓝色复合物;该复合物在620nm处有最大吸收峰, 其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。该方法灵敏度高,适合微量蛋白质分析。
自备仪器和用品:
离心机、分光光度计、石英比色皿、移液器和蒸馏水。
试剂组成和配制:
试剂一:液体30 mL×1瓶,4℃保存。
样品中可溶性蛋白质提取:
1.液体样品:澄清液体样品可以直接测定。
2.组织样品:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:20的比例(建议称取约0.05 g组织,加入1mL提取液(自备,根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水))
冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即待测液。(动物样品常常需要稀释)
3.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
测定操作:
1.分光光度计预热30 min,蒸馏水调零。
2.在石英比色皿中加入:
混匀后,测定波长620 nm吸光值,△A=A测定-A空白。
注意:空白管只需要测定一次。
计算公式:
标准曲线:y = 14.253x - 0.0007 R2 = 0.9997 x: 蛋白标准品浓度(mg/mL)
y: 吸光值差值
1.按液体样本体积计算:
Cpr(mg/mL)=(△A+0.0007)÷14.253
=0.07×(△A+0.0007)
2.按组织样本质量计算:
Cpr(mg/g)=(△A+0.0007)÷14.253×V总÷W
V总:提取液体积,1 mL; W:样本质量,g。考马斯亮蓝法测蛋白含量测定试剂盒
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